【摘 要】
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为建立一种特异、灵敏、快速检测犬细小病毒（CPV）的TaqMan MGB荧光定量PCR（FQ-PCR）方法,本研究根据GenBank中CPV的VP2基因保守区域序列设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB荧光探针,经反应条件优化,建立了CPV TaqMan MGB FQ-PCR方法。对建立的TaqMan MGB FQ-PCR检测方法进行了灵敏度、特异性、重复性试验,对疑似CPV感染临床样品进行
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为建立一种特异、灵敏、快速检测犬细小病毒（CPV）的TaqMan MGB荧光定量PCR（FQ-PCR）方法,本研究根据GenBank中CPV的VP2基因保守区域序列设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB荧光探针,经反应条件优化,建立了CPV TaqMan MGB FQ-PCR方法。对建立的TaqMan MGB FQ-PCR检测方法进行了灵敏度、特异性、重复性试验,对疑似CPV感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对。结果表明,成功建立了检测CPV的TaqMan MGB FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值（Ct值）与模板浓度有良好的线性关系,相关系数（R2）为0.9978;最低检出限为1×101拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/CPV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对5个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/CPV重组质粒分别重复检测3次结果良好;对46份临床疑似CPV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为50%,高于常规PCR方法。本研究成功建立了CPV的TaqMan MGB FQ-PCR检测方法,可用于临床上犬细小病毒病的早期快速诊断。
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