【摘 要】
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目的 探讨调控Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞(mMSCs)氧化应激耐受能力的影响.方法 直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs,通过流式细胞学检测和诱导其成骨、成软骨
【机 构】
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南京医科大学附属无锡人民医院重症医学科,江苏无锡,214023
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目的 探讨调控Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞(mMSCs)氧化应激耐受能力的影响.方法 直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs,通过流式细胞学检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化进行鉴定,采用非接触共培养诱导其向ATⅡ细胞分化;通过2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)及XMU-MP-1调节Hippo信号通路,根据不同浓度的双氧水(H2O2)共培养来模拟氧化应激损伤.应用MTT法评估H2O2诱导氧化应激损伤对mMSCs存活的影响;Western blot法检测mMSCs中Hippo信号通路关键组分,评估H2O2诱导氧化应激损伤对Hippo信号通路的影响;同时应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达,评估Hippo信号通路调控mMSCs氧化应激耐受能力的机制.结果 2-DG呈浓度依赖性的激活Hippo信号通路,而通过XMU-MP-1可抑制Hippo信号通路活化.H2O2能导致mMSCs损伤和抑制其Hippo信号通路的活性,凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达比例下调是导致mMSCs损伤的可能机制;而活化Hippo信号通路能通过上调Bcl-2/Bax表达比例,增强mMSCs氧化应激耐受能力;通过抑制Hippo信号通路下调Bcl-2/Bax表达比例,减弱mMSCs氧化应激耐受和存活能力.结论 Hippo信号通路可通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达比例,影响mMSCs的存活和氧化应激耐受能力.
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