【摘 要】
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[目的]研制小反刍兽疫羊痘活载体疫苗.[方法]利用PCR技术扩增小反刍兽疫病毒H基因,克隆到pGEM-T easy载体,Nhe Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒,将目的片段插入到真核表达载体pEGF
【机 构】
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甘肃农业大学,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,中农威特生物科技股份有限公司
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[目的]研制小反刍兽疫羊痘活载体疫苗.[方法]利用PCR技术扩增小反刍兽疫病毒H基因,克隆到pGEM-T easy载体,Nhe Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒,将目的片段插入到真核表达载体pEGFP-N1- P7.5中,得到重组载体pEGFP-N1-P7.5-H,重组载体Hind Ⅲ、Nhe Ⅰ双酶切片段EGFP-P7.5-H平末端连接到Kpn Ⅰ酶切后的载体pUC119-TK中,得到通用转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-H.[结果]经酶切鉴定及PCR扩增检测,表明构建栽体正确.pUC119-TK-EGFP-P7.5-H转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因表达.[结论]该研究为研制小反刍兽疫基因工程活载体疫苗奠定基础.
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