【摘 要】
：
T细胞受体(T cell receptor,TCR)是通过二硫键连接α链和β链或者γ链和δ链的异二聚体蛋白复合物.本研究使用原核系统体外分别表达两条单链,摸索并确定快速获得一定量的TCR蛋白的复性条件,实验发现TRA、TRB蛋白变性液按照2∶1 (mg/mg)的比例混合均匀后缓慢滴加到4℃搅拌的复性液(50 mmol/L Tris、0.4 mol/L L-精氨酸、5 mol/L脲、5mmol/L EDTA、10 mmol/L还原型谷胱甘肽、2mmol/L氧化型谷胱甘肽,pH =7.6)中复性24h,使用H
【机 构】
：
中国药科大命科学与技术学院,江苏南京210009;南京医科大学附属逸夫医院,江苏南京211166
论文部分内容阅读
T细胞受体(T cell receptor,TCR)是通过二硫键连接α链和β链或者γ链和δ链的异二聚体蛋白复合物.本研究使用原核系统体外分别表达两条单链,摸索并确定快速获得一定量的TCR蛋白的复性条件,实验发现TRA、TRB蛋白变性液按照2∶1 (mg/mg)的比例混合均匀后缓慢滴加到4℃搅拌的复性液(50 mmol/L Tris、0.4 mol/L L-精氨酸、5 mol/L脲、5mmol/L EDTA、10 mmol/L还原型谷胱甘肽、2mmol/L氧化型谷胱甘肽,pH =7.6)中复性24h,使用HitrapTM CaptoTM Q初步分离纯化,去除部分不溶性及等电点相差较大的杂质蛋白,SuperdexTM 75 Increase 10/300 GL进一步精细分离获得纯度在90％以上的TCR复合物蛋白.实验通过还原型和非还原型电泳及Western blot对纯化后的TCR蛋白进行分子量及空间结构鉴定,证明了TCR二聚体的原核表达与纯化的技术可行性.该研究为后续快速获得高纯度且正确折叠的TCR蛋白、进一步研究其功能和结构打下了夯实的基础.
其他文献
1 病例资料rn患者,男,57岁,因“上腹部闷痛1月,伴黑便2h”于2021年5月3日入住我院消化内科.患者1个月前感上腹部间歇性闷痛,饥饿时明显,进食后腹痛缓解,疼痛与体位变化无明显关系,程度较轻尚可忍受,未及时就诊,期间腹痛仍反复出现.2h前患者突发解黑色稀软大便1次,量约100 ml,伴腹部隐痛、腹胀,无畏冷、发热,无胸闷、胸痛、心悸、气喘等不适.患者否认食物、药物过敏史及家族过敏史.患者既往有高血压,长期口服贝那普利片,血压控制尚可.
目的:分析我院妇产科门诊超说明书用药情况,探讨超说明书用药的处方审核模式.方法:通过美康药师审方干预系统(PASS)统计我院2019年1～3月妇科门诊、产科门诊、生殖医学门诊中所有超说明书用药的医嘱,对科室分布、用药类型、药品品种等信息进行统计分析,并从循证药学角度评价合理性.结果:调查期内超说明书用药处方1273张,医嘱共1443条,涉及药品71种;妇科门诊超说明书用药最普遍(65.6％),其次是生殖医学中心(25.0％)和产科门诊(9.4％).主要超说明书用药类型包括超剂量用药(44.91％)、超适应
目的:利用美国FDA不良事件报告系统(FAERS)分析上市后阿帕他胺的用药不良事件,为可疑药品不良事件提供数据支持,挖掘潜在不良事件信号,为安全用药提供现实依据.方法:利用FAERS数据库2018年第一季度到2020年第四季度数据,首先进行数据清洗与目标药物名称标准化,以阿帕他胺为主要怀疑药物作为筛选条件,在16686793条记录中获得5053条阿帕他胺不良事件记录,利用不相称测定分析法中的报告比值法(ROR)和信息成分法(IC)挖掘药品不良事件信号,利用MedDRA 23.0术语集对信号结果进行系统分类
真实世界研究(real world study,RWS)应用于医疗器械的临床评价日益广泛.医疗器械与药物存在较多特征差异,医疗器械相关的临床研究方法不如药物完善.近几年,国内外的监管机构、研究组织陆续发布了一系列RWS相关文件,以指导和规范医疗器械的临床研究或临床评价工作;同时,学术研究机构也不断深入探讨医疗器械相关临床研究的方法学问题并给出了一些推荐意见.本文旨在综述医疗器械领域原始研究及循证评价的方法学研究、指导意见等,为评价医疗器械的安全性和有效性提供参考依据,为药监部门提供决策支持.
本文描述了3例癫痫患者分别以13.2,23.3,25 mg·kg-1的剂量服用丙戊酸钠,服药后出现不同程度的呕吐、睡眠增多、发作频繁等症状,脑电图提示慢波背景.患者丙戊酸钠血药浓度分别为56.53,15.63,25.84μg·ml-1,血氨分别为144,179,214 μg·dl-1,诊断为丙戊酸脑病.临床药师建议给予乳果糖联合精氨酸治疗,逐渐减少丙戊酸钠用量.随着血氨恢复正常,患者呕吐、睡眠增多等症状好转,脑电图慢波背景减少,患者康复出院.临床药师提示丙戊酸脑病与丙戊酸剂量无关,应用丙戊酸期间,一旦出现
目的:比较罗沙司他与重组人促红素治疗血液透析患者肾性贫血的有效性和经济性.方法:采用回顾性研究,收集158例规律血液透析的肾性贫血患者的临床资料,根据用药情况分为罗沙司他组78例,重组人促红素组80例.比较两组治疗前及治疗12周后血红蛋白(Hb)、血细胞比容(Hct)、血清铁蛋白(SF)变化情况,药品不良反应发生情况及相关医疗费用.以治疗后Hb≥100 g·L-1为治疗有效,采用成本-效果法评价两组治疗方案的成本-效果比(CER)和增量成本-效果比(ICER).并进行单因素敏感性分析和概率敏感性分析.结果
随着电子健康记录在医疗保健研究中的广泛应用,为了整合多个临床中心的数据进行分析和预测,以达到实现多中心临床试验的研究目的 ,分布式算法应运而生.本文通过查阅相关文献的研究方法,对数篇文献中提及的分布式算法进行了归纳、总结、整合和比较,初步得出了一些结论.在不考虑迭代通信的情况下首选不产生信息损失的GLORE算法,偏倚为0,标准差为1;若在其他临床中心的数据仅可被借用一次,则首选ODAL算法;而与原始ODAL算法相比,如果存在潜在的外部临床中心,则首选Robust-ODAL.因此应根据各临床中心给出数据的不
1病例资料rn患者男,86岁,既往有高血压、冠心病、结肠恶性肿瘤史,规律服用阿司匹林、贝那普利、螺内酯等药物,无吸烟史.2019年8月无明显诱因出现胸闷气喘不适,社区医院CT平扫示:胸腔大量积液,两肺多发结节,肝内、右肾多发低密度影.血清学检查:癌胚抗原(CEA)1 010.71 ng·ml-1,糖类抗原(CA) 125 237.8 U·ml-1,CA 199 379.5 U·m1-1.行胸腔穿刺引流后胸水送我院免疫组化标记提示肺腺癌,免疫组化:异型细胞,TTF-1(+),NapsinA(部分细胞+),C
目的 观察地塞米松玻璃体内植入物治疗非感染性葡萄膜炎的效果.方法 回顾性病例系列研究.分析2018年10月至2021年5月大连大学附属中山医院非感染性葡萄膜炎接受地塞米松玻璃体内植入物治疗的26例(26只眼)的临床资料.患者年龄24～91(53.50±16.31)岁,病程(5.73±2.86)d.随访1～6个月,观察治疗前后的视力、黄斑中心区厚度(CMT)及并发症.结果 注药后3周、1、3及6个月,视力(BCVA,logMAR)分别为0.57±0.44、0.43±0.29、0.30±0.25、0.30±0
1病例资料rn患者,男,77岁,2018年7月因“反复咳嗽伴痰中带血2月”入院.胸部CT示:左肺上叶舌段支气管闭塞,局部见软组织密度影.支气管镜活检病理示:低分化鳞状细胞癌.8月10日外院行胸腔镜下肺癌根治术(左上肺切除+淋巴结清扫),术后病理:低分化鳞形细胞癌,送检淋巴结1枚转移,分期:pⅢA期(T4N1M0).9月30日复检术后病理并结合苏木精-伊红染色法(HE)切片考虑为肺腺癌,组织基因检测ROS1CD74重排,血浆基因检测未见与临床用药可能相关体细胞突变.患者于2018年9～12月行紫杉醇+卡铂方