人铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

来源 :中国老年学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a234917658
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目的构建人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白,为其临床应用奠定基础。方法根据已报道的hCu,Zn-SOD基因序列,采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞(PBMC)中获得SOD cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,重组质粒经酶切,PCR及测序鉴定正确后,将目的片段插入原核表达载体PET20b(+)中并转化大肠杆菌DE3,通过IPTG诱导表达出目的蛋白,经镍固定金属亲和层析纯化。采用邻苯三酚自身氧化法测定SOD生物学活性。结
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