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目的:
研究载中国单疱病毒胸苷激酶基因逆转录病毒重组体(RV-HSV-TKc)和羟甲基无环鸟苷(GCV)体外转染和杀伤脑胶质瘤效果,探索应用该系统基因治疗脑胶质瘤。
方法:RV-HSV-TKc重组体病毒感染胶质瘤细胞,G418筛选转染阳性胶质瘤细胞克隆。Northern杂交检测抗G418胶质瘤细胞中的TKc基因表达。药物敏感实验观察TKc胶质瘤细胞对GCV的毒性反应。
结果:1.0mg/ml G418筛选10~14天获抗性胶质瘤细胞克隆;Northern杂交显示抗G418细胞TKc基因明显表达;TKc胶质瘤细胞对GCV高度敏感,其ED50为:C6TKc0.02μg/ml,U251TKc0.006μg/ml,U87TKc0.004μg/ml,TKc胶质瘤细胞对GCV的敏感性是非转基因胶质瘤细胞的500倍以上。
结论:载中国TKc基因逆转录病毒重组体可有效转染脑胶质瘤细胞并使其对GCV高度敏感,该系统可望用于脑胶质瘤的基因治疗。