【摘 要】
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目的 探讨3种外周血单个核细胞（PBMC）分离方法对后续流式细胞术分析结果的影响，并比较PBMC冻存前后流式细胞术分析结果。方法 2019年5月，选择四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室6位体检健康的工作人员为受试对象，采集每位受试者外周血15 mL,平均分为3份，分别采用Ficoll离心法、羟乙基淀粉（HES）沉降法和HES+Ficoll法分离PBMC。显微镜下观察3种方法分离所得PBMC的
【机 构】
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四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室
【基金项目】
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四川大学华西医院基金项目（编号：139170082）；
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目的 探讨3种外周血单个核细胞（PBMC）分离方法对后续流式细胞术分析结果的影响，并比较PBMC冻存前后流式细胞术分析结果。方法 2019年5月，选择四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室6位体检健康的工作人员为受试对象，采集每位受试者外周血15 mL,平均分为3份，分别采用Ficoll离心法、羟乙基淀粉（HES）沉降法和HES+Ficoll法分离PBMC。显微镜下观察3种方法分离所得PBMC的形态，并采用细胞计数仪进行细胞计数。分离所得PBMC于冻存前和冻存6个月后行流式细胞术分析，计算PBMC中淋巴细胞所占比例、淋巴细胞中活细胞（FVS780荧光强度小于102为活细胞）所占比例（细胞存活率）和活细胞中CD4+T细胞数与CD8+T细胞数的比值（CD4+T/CD8+T）。结果 3种分离方法得到的PBMC形态均一致。与其他2种分离方法相比，HES沉降法分离得到的PBMC除淋巴细胞外还有部分红细胞。HES沉降法所得PBMC数量显著多于Ficoll离心法与HES+Ficoll法（P＜0.05）;Ficoll离心法所得PBMC数量高于Ficoll+HES法（P＜0.05）。冻存前和冻存6个月后，Ficoll离心法、HES沉降法和Ficoll+HES法得到的PBMC的存活率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）;HES沉降法得到的PBMC中淋巴细胞比例显著低于Ficoll离心法和HES+Ficoll法（P＜0.05）;Ficoll离心法与HES+Ficoll法所得到的PBMC中淋巴细胞比例比较差异无统计学意义（P＞0.05）;Ficoll离心法、HES沉降法与Ficoll+HES法得到的存活细胞中CD4+T/CD8+T比值比较差异无统计学意义（P＞0.05）。3种方法分离得到的PBMC冻存后淋巴细胞存活率均低于冻存前（P＜0.05）,PBMC中淋巴细胞比例均高于冻存前（P＜0.05）;存活细胞中CD4+T/CD8+T比值与冻存前比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 HES沉降法分离得到的PBMC纯度（混有少量红细胞）不如其他2种方法，但其操作更为简便。且无论是冻存前的PBMC还是冻存6个月后的细胞，流式细胞术分析3种方法分离得到的PBMC的结果无统计学差异，因此，HES沉降法适用于抗凝全血的PBMC分离提取。
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