【摘 要】
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目的 探讨miR-451a通过调控PI3K/Akt通路对食管鳞状细胞癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药的作用及其可能机制.方法 人正常食管鳞状上皮细胞系Het-1A、人食管鳞状细胞癌细胞系Eca109、人食管鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系Eca109/DDP,采用实时荧光定量PCR法检测3种细胞miR-451a相对表达量,采用Western blot法检测3种细胞KIF2A蛋白相对表达量.对数生长期Eca109/DDP细胞分为空白对照组(不进行转染操作)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-451
【机 构】
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陆军军医大学附属第一医院胸外科,重庆 400038
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目的 探讨miR-451a通过调控PI3K/Akt通路对食管鳞状细胞癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药的作用及其可能机制.方法 人正常食管鳞状上皮细胞系Het-1A、人食管鳞状细胞癌细胞系Eca109、人食管鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系Eca109/DDP,采用实时荧光定量PCR法检测3种细胞miR-451a相对表达量,采用Western blot法检测3种细胞KIF2A蛋白相对表达量.对数生长期Eca109/DDP细胞分为空白对照组(不进行转染操作)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-451a模拟物组(转染miR-451a模拟物),采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞miR-451a相对表达量,采用Western blot法检测3组细胞KIF2A蛋白相对表达量.采用荧光素酶报告实验检测miR-451a和KIF2A的靶向关系.对数生长期Eca109/DDP细胞再分为对照组(不进行转染操作)、miR-NC+ oe-NC组(转染miR-NC+ oe-NC)、miR-451a模拟物+oe-NC组(转染miR-451a模拟物+oe-NC)、miR-451a模拟物+oe-KIF2A组(转染miR-451a模拟物+ oe-KIF2A),4组细胞分别加入不同浓度DDP,采用CCK-8实验检测细胞活力及DDP对细胞的半数抑制浓度,确定DDP在后续实验中的浓度.采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞miR-451a相对表达量,采用Western blot法检测4组细胞KIF2A、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白相对表达量,比较p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt,采用EdU实验检测4组细胞增殖情况,采用流式细胞术检测4组细胞凋亡率.结果 Eca109/DDP细胞miR-451a相对表达量(0.32±0.06)低于Het-1A细胞(1.00±0.09)、Eca109细胞(0.62±0.07)(P＜0.05),KIF2A蛋白相对表达量(0.65±0.10)高于Het-1A细胞(0.21±0.05)、Eca109细胞(0.41±0.08) (P＜0.05);Eca109细胞miR-451a相对表达量低于Het-1A细胞(P＜0.05),KIF2A蛋白相对表达量高于Het-1A细胞(P＜0.05).miR-451a模拟物组细胞miR-451a相对表达量(2.47±0.13)高于miR-NC组(0.96±0.04)、空白对照组(1.00±0.03) (P＜0.05),KIF2A蛋白相对表达量(0.21±0.03)低于miR-NC组(0.74土0.06)、空白对照组(0.76土0.05)(P＜0.05);miR-NC组细胞miR-451a和KIF2A蛋白相对表达量与空白对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).荧光素酶报告实验结果显示,miR-451a靶向调控KIF2A.DDP在后续实验中的浓度为90μmol/L.miR-451a模拟物+oe-NC组、miR-451a模拟物+oe-KIF2A组细胞miR-451a相对表达量高于miR-NC+ oe-NC组、对照组(P＜0.05),miR-451a模拟物+oe-NC组与miR-451a模拟物+oe-KIF2A组比较差异无统计学意义(P＞0.05);miR-451a模拟物+oe-NC组细胞KIF2A蛋白相对表达量低于对照组、miR-NC+ oe-NC组、miR-451a模拟物+oe-KIF2A组(P＜0.05),对照组、miR-NC+ oe-NC组低于miR-451a模拟物+oe-KIF2A组(P＜0.05).miR-451a模拟物+oe-NC组不同浓度DDP作用下的细胞活力、DDP对细胞的半数抑制浓度、EdU阳性细胞数、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均低于对照组、miR-NC+oe-NC组、miR-451a模拟物+oe-KIF2A组(P＜0.05),miR-451a模拟物+oe-KIF2A组均低于对照组、miR-NC+ oe-NC组(P＜0.05);miR-451a模拟物+oe-NC组细胞凋亡率高于对照组、miR-NC+ oe-NC组、miR-451a模拟物+oe-KIF2A组(P＜0.05),miR-451a模拟物+oe-KIF2A组高于对照组、miR-NC+oe-NC组(P＜0.05);以上指标对照组与miR-NC+oe-NC组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-451a通过抑制KIF2A表达,从而抑制PI3K/Akt通路,增加食管鳞状细胞癌耐药细胞对DDP的敏感性,发挥抗肿瘤作用.
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