【摘 要】
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目的 研究miR-145-3p能否调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的自噬及其可能存在的作用机制.方法 收集12～18岁因正畸需要减数而拔除的健康前磨牙,采集和培养HPDLFs,并进行鉴定.将
【机 构】
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610100 四川省成都市龙泉驿区第一人民医院口腔科;重庆医科大学附属口腔医院正畸科
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目的 研究miR-145-3p能否调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的自噬及其可能存在的作用机制.方法 收集12～18岁因正畸需要减数而拔除的健康前磨牙,采集和培养HPDLFs,并进行鉴定.将miR-145-3p类似物(miR-145-3p-mimics组)、miR-145-3p抑制物(miR-145-3p-inhibitor组)、阴性对照(miR-145-3p normal control,miR-145-3p-NC组)以及带有GFP-LC3的质粒转染至HPDLFs,24 h后荧光显微镜观察荧光发生情况.双荧光素酶报告实验验证miR-145-3p与HDAC4的靶向关系,Western Blot检测各转染组细胞内HDAC4、Beclin-1、P62和LC3的蛋白表达.结果 免疫组化结果表明,波形蛋白为阳性染色而角蛋白呈阴性染色,证明其为无混杂细胞的HPDLFs.转染结果显示,miR-145-3p-mimics组的细胞内荧光强度最高,有大量自噬体形成,而miR-145-3p-inhibitor组荧光最弱.双荧光素酶报告实验证实miR-145-3p靶向抑制HPDLFs细胞中HDAC4的表达.4组细胞中miR-145-3p-inhibitor组P62蛋白表达最高(P0.05);miR-145-3p-mimics组细胞内Beclin-1和LC3蛋白表达最高(P0.05).结论 miR-145-3p在HPDLFs中可调控自噬,这种作用可能是通过靶向抑制HDAC4表达实现的.
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