第一部分mi R-145-3p和ZEB1在宫颈癌组织中的表达及其与临床特征的关系目的:分析mi R-145-3p和ZEB1m RNA在宫颈癌中的相对表达水平,探讨二者与宫颈癌患者临床特征的关系,为宫颈癌的发病分子机制及进展研究提供新的依据。方法:选取2020年1月至2021年9月期间,于河北医科大学第二医院经阴道镜活检或宫颈锥切术病理证实为宫颈鳞状细胞癌且FIGO分期为IB2期以上患者的宫颈癌组织标本32例为研究组。收集同期因妇科良性疾病且宫颈癌筛查阴性患者的正常宫颈组织标本32例为对照组。利用实时荧光定量PCR技术（q RT—PCR）检测宫颈癌组织及正常宫颈组织中mi R-145-3p和ZEB1中的m RNA相对表达量,并进行比较。同时,分析mi R-145-3p和ZEB1m RNA的相对表达量与患者临床病理特征的关系。结果:1.mi R-145-3p在宫颈癌组织中的相对表达量明显低于其在正常对照组织中的表达,差异具有统计学意义（P=0.00）。2.ZEB1m RNA在宫颈癌组织中的相对表达量明显高于其在正常对照组织中的表达,差异具有统计学意义（P=0.00）。3.在宫颈癌组织中mi R-145-3p相对表达量呈现低表达,而ZEB1m RNA呈现高表达的状态,二者存在负相关性（r=-0.676）。4.宫颈癌患者癌组织中mi R-145-3p、ZEB1的m RNA相对表达量与患者年龄、绝经状态、HPV感染情况、TCT情况无关（P＞0.05）,而与FIGO分期、肿瘤大小相关（P＜0.05）。而淋巴结的转移与ZEB1m RNA的高表达相关,而与mi R-145-3p表达水平无关。小结:1.与正常宫颈组相比,mi R-145-3p在宫颈癌组织中的相对表达量降低,ZEB1m RNA的相对表达量明显增高;2.在宫颈癌组织中mi R-145-3p呈现低表达,而ZEB1m RNA呈现高表达的状态,二者存在负相关性。3.宫颈癌癌组织中mi R-145-3p、ZEB1m RNA的相对表达水平与患者年龄、绝经状态、HPV感染情况、TCT情况无关,而与患者的FIGO分期、肿瘤大小相关。淋巴结的转移与ZEB1m RNA的高表达相关。第二部分锌指E盒结合蛋白1（ZEB1）在宫颈癌上皮间质转化中的作用目的:通过研究宫颈癌组织及正常宫颈组织中ZEB1,E-钙粘蛋白和Vimenin的表达情况,以评估ZEB1在宫颈癌上皮向间质转化中的作用。方法:选取2020年1月至2021年9月期间,于河北医科大学第二医院经阴道镜活检或宫颈锥切术病理证实为宫颈鳞状细胞癌且FIGO分期为IB2期以上患者的石蜡组织标本20例为研究组,收集同期因妇科良性疾病且宫颈癌筛查阴性患者的正常宫颈石蜡组织标本20例为对照组。（研究组及对照组均选自第一部分研究的病例）。使用免疫组织化学法对组织中ZEB1、E-cadherin和Vimentin三种蛋白的表达进行测定和比较。结果:1.宫颈癌组织中ZEB1和Vimentin表达的阳性率显著高于正常宫颈组,而E-cadherin表达的阳性率则低于正常宫颈组。差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.经Pearson相关性分析显示:ZEB1的表达与E-cadherin的表达呈负相关性,而与Vimentin的表达呈正相关性。小结:1.宫颈癌组织中ZEB1和Vimentin表达的阳性率显著高于正常宫颈组,而E-cadherin表达的阳性率则低于正常宫颈组。2.ZEB1的表达与E-cadherin的表达呈负相关性,而与Vimentin的表达呈正相关性。3.ZEB1在宫颈癌组织中靶向调控下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,参与宫颈鳞状上皮间质转化。第三部分mi R-145-3p通过靶向调控ZEB1参与体外宫颈癌细胞的增殖、迁移、凋亡和侵袭能力的实验研究目的:以宫颈癌细胞系C33A为研究对象,构建相应的慢病毒质粒,使mi R-145-3p和ZEB1过表达或敲低,从而探讨mi R-145-3p靶向调控ZEB1促进宫颈癌上皮向间质转化,及促进肿瘤进展的机制,为其它临床相关研究提供参考。方法:对人宫颈癌细胞系C33A进行培养、传代,根据试剂盒说明书,使用Lipofectamine 2000转染试剂以20nnmol/L的剂量将mi R-145-3pMIMC、mi R-145-3p-Inhibitor和Mir-NC转染到C33A细胞中,并在转染48小时后测量转染效率;进行测定细胞增殖的细胞克隆试验;采用膜联蛋白V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;通过划痕试验测定细胞迁移;通过Transwell分析确定细胞侵袭;使用Targetscan生物软件预测mi R-145-3p的相关靶点,发现ZEB1的3’UTR末端与mi R-145-3p之间存在互补结合位点。使用荧光素酶报告系统确定两者之间的靶向关系,用荧光素酶活性试剂盒测定荧光素酶活性;利用QT-PCR测定RNA量,用紫外分光光度法测定总RNA的浓度和纯度;利用蛋白质印迹法检测细胞中E-钙粘蛋白和波形蛋白的表达;结果:1.mi R-145-3p的转染效率转染C33A细胞48h后,通过QT-PCR测定mi R-145-3p的表达水平。结果表明,与NC组相比,MIMics组mi R-145-3p的表达水平显著提高,抑制剂组的表达水平显著下调。差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.mi R-145-3p的过表达和敲低对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响与NC组相比,MIMics组细胞克隆形成能力显著降低,凋亡率显著提高,抑制剂组细胞克隆形成能力显著提高,凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.过表达和敲低mi R-145-3p对宫颈癌细胞侵袭转移的影响与NC组相比,MIMics组细胞的迁移和侵袭能力显著降低,抑制剂组细胞的迁移和侵袭能力显著增加,具有统计学差异。4.过表达和敲低mi R-145-3p对宫颈癌细胞EMT蛋白表达的影响与NC组相比,MIMics组E-钙粘蛋白表达增加,Vimentin表达降低,而抑制剂组E-钙粘蛋白表达降低,Vimentin表达增加,上述差异有统计学意义（P＜0.05）。5.双荧光素酶表达基因的分析结果表明,mi R-145-3p和ZEB1处于靶向调控关系中。与Mir-NC相比,mi R-145-3p MUT与Mir-NC（P＞0.05）无显著差异,mi R-145-3p WT的荧光素酶活性显著降低。差异具有统计学意义（P＜0.05）。6.ZEB1过表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响:与载体组相比,ZEB1组的克隆形成能力显著增强,凋亡率降低,有统计学意义（P＜0.05）。7.ZEB1过表达诱导的宫颈癌细胞的侵袭和转移:与载体组相比,ZEB1组细胞迁移和侵袭数量显著上调,差异有统计学意义（P＜0.05）。8.ZEB1过表达对宫颈癌细胞EMT蛋白表达的影响:与载体组相比,ZEB1组E-钙粘蛋白的表达降低,Vimentin的表达增加上述差异有统计学意义。小结:1.转染C33A细胞48h后,与NC组相比,模拟组mi R-145-3p表达水平显著升高,而抑制剂组mi R-145-3p表达水平显著下调,差异有统计学意义。2.与正常对照组相比,模拟组细胞克隆形成能力、迁移和侵袭能力以及波形蛋白表达显著降低,而凋亡率和E-钙粘蛋白表达显著增加。在抑制剂组,细胞克隆能力、细胞迁移和侵袭能力以及波形蛋白表达显著增强,而细胞凋亡率和E-钙粘蛋白表达显著降低,具有统计学意义。3.对双荧光素酶表达基因的分析结果表明,mi R-145-3p和ZEB1存在靶向调控关系。与Mir-NC相比,mi R-145-3p MUT和Mir-NC之间没有显著差异,mi R-145-3p WT差异有统计学意义;与载体组相比,ZEB1组的细胞克隆能力、细胞迁移和侵袭的数量以及波形蛋白的表达均显著增加,而细胞凋亡率和E-钙粘蛋白的表达均降低,具有统计学意义。结论:1.mi R-145-3p在宫颈癌组织中低表达,ZEB1m RNA在癌组织中高表达;mi R-145-3p与ZEB1间存在负相关性。2.宫颈癌癌组织中mi R-145-3p、ZEB1m RNA的表达与患者年龄、绝经状态、HPV感染情况、TCT情况无关,而与FIGO分期、肿瘤大小相关。淋巴结的转移与ZEB1m RNA的高表达相关。3.免疫组化显示:宫颈癌组织中ZEB1和Vimentin表达的阳性率显著高于正常宫颈组,而E-cadherin表达的阳性率则较低正常宫颈组。ZEB1的表达与E-cadherin的表达呈负相关性,而与Vimentin的表达呈正相关性。4.ZEB1在宫颈癌组织中靶向调控下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,参与宫颈鳞状上皮间质转化。5.细胞实验证实mi R-145-3p和ZEB1存在靶向调控关系,mi R-145-3p可靶向调控ZEB1,已经明确mi R-145-3p和ZEB1通过对宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭调控来影响宫颈癌的发生和发展。6.mi R-145-3p和ZEB1对宫颈癌发生和发展的机制阐述可为宫颈癌的早期诊断提供分子生物标记,以及为后续的治疗提供新的靶点。