【摘 要】
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目的构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA
【机 构】
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南方医科大学病理学系//广东省分子肿瘤病理学重点实验室,南方医科大学南方医院妇产科
【基金项目】
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国家自然科学基金（30871156）, 广东省科技计划项目（2009B030803041 2010B031600091）, 广东省自然科学基金（8151051501000057）
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目的构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA1 3＇UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值（F）和海肾荧光素值（R）,以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及
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