【摘 要】
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目的:探究葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)对食管癌细胞顺铂耐药性的作用及其可能的作用机制.方法:收集29例食管癌组织及其癌旁组织,RT-PCR和Western blot实验检测组织中GLUT1的表达;以EC109细胞株为亲本细胞,采用顺铂间歇冲击的方法构建顺铂耐药EC109/CDDP细胞株;CCK-8试剂盒测定EC109细胞和EC109/CDDP细胞顺铂IC50;RT-PCR实验检测细胞中GLUT1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中GLUT1、LC3B、Beclin1和p62蛋白表达;Ed
【机 构】
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陕西省肿瘤医院胸部肿瘤外科 西安,710061
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目的:探究葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)对食管癌细胞顺铂耐药性的作用及其可能的作用机制.方法:收集29例食管癌组织及其癌旁组织,RT-PCR和Western blot实验检测组织中GLUT1的表达;以EC109细胞株为亲本细胞,采用顺铂间歇冲击的方法构建顺铂耐药EC109/CDDP细胞株;CCK-8试剂盒测定EC109细胞和EC109/CDDP细胞顺铂IC50;RT-PCR实验检测细胞中GLUT1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中GLUT1、LC3B、Beclin1和p62蛋白表达;EdU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡.结果:与癌旁组织比较,癌组织中GLUT1 mRNA表达和蛋白表达明显升高(P＜0.05).EC109/CDDP细胞株构建成功.与EC109细胞比较,EC109/CDDP组细胞中GLUT1表达、LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ和Beclin1蛋白表达明显升高(P＜0.05),p62蛋白表达明显降低(P＜0.05).与NC组比较,5、10、20、40和80 μmol/L顺铂处理si-GLUT1组细胞活力明显降低(P＜0.05),其中NC组细胞顺铂IC5.=32.47 μmol/L,si-GLUT1组细胞顺铂IC5.=16.30 μmol/L.与空白对照组比较,顺铂组EC109/CDDP细胞中LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ和Beclin1蛋白表达明显升高(P＜0.05),p62蛋白表达明显降低(P＜0.05),EdU阳性细胞数和凋亡率差异无统计学意义;与顺铂+NC组比较,顺铂+si GLUT1组EdU阳性细胞数、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率和p62蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论:食管癌中GLUT1蛋白通过上调自噬促进食管癌细胞顺铂耐药性.
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