【摘 要】
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以阪崎肠杆菌（ATCC29544）的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b（＋）,构建重组表达质粒pET22b-malA。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3
【基金项目】
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广东省中国科学院全面战略合作项目（2010B090301037）, 广东省科技计划项目（No.2010B020316003）
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以阪崎肠杆菌（ATCC29544）的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b（＋）,构建重组表达质粒pET22b-malA。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,进行优化表达。采用尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过ELISA测定效价,并通过免疫荧光法鉴定与菌体表面结合能力。结果表明克隆的目的基因全长1677bp,与Genebank的malA比较具有100%的同源性。带His标签的融合蛋白以包涵体形式表
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