目的 观察在拉伸应力作用下,细胞骨架(CSK)破坏剂和膜离子通道阻滞剂对体外培养兔膝关节软骨细胞代谢的影响.方法 2月龄新西兰大白兔10只,无菌条件下剖取双膝,并将其消化为软骨细胞,并随机分为8组,即对照组,微管、微丝、中间纤维破坏组,Na+、K+、Ca2+、Cl-通道阻滞组.在拉伸应力作用下干预3d后,苏木素-伊红(HE)染色观察其形态.采用酶联免疫吸附试验(ELASA)和阿尔新蓝染色检测各组标本上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-13、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1及糖胺聚糖(GAG)含量,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、MMP-3、TIMP-1、微管蛋白、肌动蛋白、波形蛋白 mRNA的相对表达量.结果 HE染色软骨细胞形态由正常的软骨细胞变为排列不均匀,形态各异,细胞核深染,大小不一,细胞质减少.CSK破坏组上清液中GAG的浓度分别为15.6、18.0、14.0 μg/L,较对照组24.2 μg/L降低(P＜0.05)；微丝、中间纤维破坏组MMP-13的浓度分别为9.3、9.8 μg/L,较对照组12.7 μg/L降低(P＜0.05),中间纤维破坏组TIMP-1的浓度为5.1 mg/L,较对照组2.3 mg/L明显上升(P ＜0.05)；Ca2+、Cl-离子通道阻滞组GAG浓度分别为6.4、96.0 μg/L,较对照组差异有统计学意义(P＜0.05)；K+、Cl-通道阻滞组MMP-13浓度分别为8.8、6.7μg/L,较对照组均降低(P＜0.05)；各实验组软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA相对表达量均下调(P＜0.05)；细胞骨架破坏的各组中,其相对应的蛋白mRNA表达量分别为54.4、52.1、51.3 ng/μl,较对照组减少且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在拉伸应力作用下,破坏CSK和阻滞离子通道使软骨细胞发生退化,其中微管、中间纤维和Na+、Cl-通道可能与软骨细胞分泌的基质密切相关。
膜离子通道阻滞及细胞骨架破坏对拉伸应力刺激兔关节软骨细胞代谢的影响
【摘 要】
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目的 观察在拉伸应力作用下,细胞骨架(CSK)破坏剂和膜离子通道阻滞剂对体外培养兔膝关节软骨细胞代谢的影响.方法 2月龄新西兰大白兔10只,无菌条件下剖取双膝,并将其消化为软骨细胞,并随机分为8组,即对照组,微管、微丝、中间纤维破坏组,Na+、K+、Ca2+、Cl-通道阻滞组.在拉伸应力作用下干预3d后,苏木素-伊红(HE)染色观察其形态.采用酶联免疫吸附试验(ELASA)和阿尔新蓝染色检测各组标
【机 构】
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030001太原,山西医科大学第二医院骨科,030001太原,山西医科大学第二医院骨科,030001太原,山西医科大学第二医院骨科
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2013年30期
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