【摘 要】
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目的 利用大肠杆菌高效表达并纯化E型肉毒神经毒素(BoNT/E)受体结合区Hc的亚结构域EHc?C蛋白,并进行免疫原性研究.方法 利用PCR技术扩增出EHc?C基因,克隆于载体pTIG?Trx?His?
【机 构】
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北京交通大学生命科学与生物工程研究院,北京100044;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100071;北京交通大学生命科学与生物工程研究院,北京,100044;军事科学院军事医学研究院生
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目的 利用大肠杆菌高效表达并纯化E型肉毒神经毒素(BoNT/E)受体结合区Hc的亚结构域EHc?C蛋白,并进行免疫原性研究.方法 利用PCR技术扩增出EHc?C基因,克隆于载体pTIG?Trx?His?tag中得到重组质粒pTIG?Trx?EHc?C,转入表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,超声破碎菌体,收集上清,经镍柱亲和纯化获得重组抗原EHc?C蛋白,通过SDS?PAGE和Western印迹检测纯化效果,之后免疫BALB/c小鼠,评价其免疫原性.结果通过原核表达纯化获得了纯度>90％的重组抗原EHc?C蛋白,该重组抗原作为亚单位疫苗免疫小鼠产生了特异性抗体反应,10μg剂量抗原蛋白3次免疫小鼠即可抵抗104 LD50E型肉毒毒素攻击,血清中和抗体效价可达1.00 U/ml.结论 获得的重组EHc?C抗原免疫原性良好,免疫小鼠后能抵抗E型肉毒毒素的攻击,产生强烈保护作用,可作为亚单位候选疫苗预防E型肉毒毒素中毒或用于研究肉毒毒素疫苗和抗体的功能表位.
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