【摘 要】
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目的 探讨银椴苷对肝癌细胞生物学行为的影响和分子机制.方法 采用不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L)的银椴苷分别处理肝癌细胞Huh748 h,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell实验检测细胞活力、凋亡率以及迁移、侵袭能力.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-218和神经元细胞表达发育下调基因9(NEDD9)mRNA的表达水平,蛋白质印迹(Western blot)检测NEDD9蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验和Western blot验
【机 构】
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赣南医学院第一附属医院消化内科,赣州 341000
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目的 探讨银椴苷对肝癌细胞生物学行为的影响和分子机制.方法 采用不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L)的银椴苷分别处理肝癌细胞Huh748 h,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell实验检测细胞活力、凋亡率以及迁移、侵袭能力.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-218和神经元细胞表达发育下调基因9(NEDD9)mRNA的表达水平,蛋白质印迹(Western blot)检测NEDD9蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-218和NEDD9的靶向调控关系.将miR-218抑制物(anti-miR-218)转染Huh7细胞,检测干扰miR-218表达联合银椴苷处理对Huh7细胞活力、凋亡、迁移和侵袭的影响.结果 与空白组比较,银椴苷处理组Huh7细胞活力、迁移和侵袭数、NEDD9 mRNA和蛋白表达显著降低,凋亡率、miR-218表达显著升高(均P<0.05).miR-218可与NEDD9直接结合.过表达miR-218后NEDD9表达水平降低(均P<0.05),干扰miR-218后NEDD9表达水平升高(均P<0.05).干扰miR-218表达可逆转银椴苷对Huh7细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响(均P<0.05).结论 银椴苷可诱导肝癌细胞凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭,其机制可能是通过上调miR-218/NEDD9轴实现的.
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