【摘 要】
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目的探讨晚期糖基化终末产物(AEGs)对内皮细胞衰老以及内皮屏障功能的影响和作用机制。 方法体外分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，随机分为3组，分别为空白对照组(无干预)、牛血清白蛋白(BSA)对照组(BSA干预72 h)、AGEs组(AGEs干预72 h)，分别进行β行半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色；实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)
【机 构】
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华中科技大学同济医学院同济医院综合医疗科，武汉 430060,华中科技大学同济医学院同济医院综合医疗科，武汉 430060,华中科技大学同济医学院同济医院综合医疗科，武汉 430060,华中科技大学同
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目的探讨晚期糖基化终末产物(AEGs)对内皮细胞衰老以及内皮屏障功能的影响和作用机制。
方法体外分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，随机分为3组，分别为空白对照组(无干预)、牛血清白蛋白(BSA)对照组(BSA干预72 h)、AGEs组(AGEs干预72 h)，分别进行β行半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色；实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组衰老相关基因p53、p21、p16的表达；2'，7'-二氯荧光黄双乙酸盐法(DCFH-DA)测定细胞内活性氧；细胞电阻计测量各组的跨内皮细胞电阻(TER)；蛋白免疫印迹法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)和肌球蛋白轻链(MLC)的表达。
结果与空白对照组(7.81±0.35)%、BSA对照组(7.64±0.91)%相比，AGEs干预HUVECs引起SA-ECs轻链染色阳性率明显增加(67.30±0.75)%(P<0.01)，以及衰老相关基因p53、p21、p16的表达量增加(P<0.05)。空白对照组(48.0±6.3)Ω·cm2与BSA对照组(42.0±7.8)Ω·cm2TER比较差异无统计学意义(P>0.05)，而AEGs组TER(27.0±4.2)Ω·cm2降低，与空白对照组和BSA对照组相比，差异有统计学意义(P<0.01)。空白对照组(38.36±8.55)%与BSA对照组(41.67±6.93)%活性氧生成比较差异无统计学意义(P>0.05)，而AEGs组(69.31±8.47)%活性氧生成增加(P<0.05)，同时AEGs组的MLCK表达与p-MLC/MLC明显增加(P<0.05)。
结论AGEs通过促进活性氧生成和氧化应激，以及调节MLCK信号通路影响内皮细胞衰老和内皮屏障功能障碍。
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