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【中图分类号】R556.61 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0019(2009)6-0031-03
【摘要】目的:了解桂林市妊娠妇女中地贫的发病情况,做好优生优育工作。方法:我们对800例妊娠妇女进行了地贫筛查及基因检测,并对符合地贫产前诊指征的夫妇进行了产前诊断。结果:在800例血样品中共检出地贫90例,检出率为11.25%。α地贫检出率为4.75%,其中静止型α地贫以-α3.7/αα居多,轻型α地贫以--SEA /αα居多,缺失型α地贫占92.24%,非缺失型α地贫占7.76%;β地贫检出率为6.50%,其中以CD41-42(-TTCT)居多,以3种基因型CD41-42 (-TTCT)、CD17(A→T)和IVS-II-654(C→T) 为最常见,占突变基因的构成比合计达84.61%,在52例被确定β地贫基因型的样品中,有3 例检出为β地贫复合α地贫,检出率为0.38%,6对符合地贫产前诊断指征的夫妇,均接受了对其胎儿做产前诊断,共检出2例重型地贫胎儿。结论:桂林市实际为育龄人群地贫高发区。必须进行地贫筛查,以防止重型地贫患儿。
【关键词】妊娠妇女;地中海贫;筛查;产前诊断
地中海贫血(简称地贫)是由珠蛋白基因缺失或突变导致肽链合成障碍而引起的溶血性贫血,是南方地区患病率最高的人类单基因遗传病之一。其重型地贫会给家庭和社会带来极大的危害。由于此病目前尚无根治的好方法。因此,防止重型地贫儿的出生就成了最有效的方法[1],这种方法通常是在高发地区进行人群的筛查,若发现双方同为地贫携带者又有可能生育重型地贫患儿的夫妇,建议对其胎儿做产前诊断,如查出为重型地贫胎儿,及时地终止妊娠来实现,为了解桂林市妊娠妇女中地贫的发病情况,做好优生优育工作。我们对800例妊娠妇女进行了地贫筛查及基因检测,现将调查结果报道如下:
1 对象与方法
1.1 对象:桂林市内 5个城区人口,2008年1 月至12 月,来我院做产前检查的孕妇,年龄20-35岁,共800 人。
1.2 标本采集:采集早晨空腹静脉血液2ml于含EDTA-K2的真空采血管内,2小时内检测MCV,剩余血妥善保管留做血红蛋电泳及基因分析。
1.3 仪器:SystemKX-21自动血细胞分析仪(日本),Sebia全自动血红蛋白电泳仪(法国),AmpGene Syetem-DNA ThermalCyeler4800(美国)。
1.4 试剂:血球分析试剂:日本 SystemKX-21自动血细胞分析仪原装配套进口试剂;血红蛋白电泳试剂:法国Sebia全自动血泳仪原装配套进口试剂;地贫基因检测试剂: α地贫能检测3种常见缺失型a地贫基因(--SEA/ 、-α3.7/、-α4.2/),3种非缺失突变型α地贫基因(HbCS, HbQS、HbWS);β地贫能检测17种β地贫基因型[CD41-42(-TTCT)、CD43(A→T)、IVS-II-654(C→T)、-28(A→G)、-29(A→G)、-30(T→C)、-32(C→A)、CD71-72(+A)、βE(GAG→AAG)、CD17(A→T)、CD14-15(+G)、CD31(-C)、CD27-28(+C)、IVS-I-1(G→A,G→T)、IVS-1 -5(G→C)、CAP+1(A→C)、initiation codon(ATG→AGG)],均采用PCR-反向斑点杂交技术(RDB)分析,由深圳亚能生物技有限公司提供。
1.5 方法:先按照SystemKX-21自动血细胞分析仪和Sebia全自动血红蛋白电泳仪的标准操作程序,检测红细胞MCV和血红蛋白电泳,联合进行地贫筛查,结果判断:①若MCV>79 fl,HbA和HbA2量正常,则视为地中海贫血筛查正常;②若MCV<79 fl,HbA和HbA2量正常,且检测血清铁蛋白量正常,则不考虑地中海贫血;③若MCV<79 fl,HbA2≤2.5%,则疑为α地中海贫血;④若MCV<79 fl,HbA2>3.5%或同时有HbF>3%;或HbA2正常,但HbF>3%,则疑为β地中海贫血或β地中海贫血与α地中海贫血复合型。③、④进一步做按地贫基因检测相关标准程序检测α-地贫基因和β-地贫基因,以检出地贫基因来确诊地贫。同时对所有已确定β地贫基因的样品均再进行α地贫基因分析,以诊断β地贫复合α地贫。
1.6 产前诊断:对于确诊有地贫的孕妇,同时检测其丈夫携带地贫基因情况,若发现符合如下地贫产前诊断指征: ①夫妻双方均为轻型α地贫基因携带者;②夫妻双方均为β地贫基因携带者;③夫妇一方为轻型α地贫基因携带者,另一方为轻型β地贫复合轻型α地贫基因携带者;④夫妇一方为轻型α地贫基因携带者,另一方为中间型α地贫基因携带者。在遵循知情同意的原则的情况下,建议对其胎儿进行产前地贫诊断。做产前诊断时,在孕早期取绒毛或羊水作地贫基因诊断;怀孕超过22周则可通过B超下脐静脉穿刺抽取胎血进行地贫基因诊断。
1.7 统计学分析:采用SPSS10.0统计软件对实验数据进行分析。
2 结果
2.1 α和β地贫检出结果:在800例血样品中,共筛出39例疑为α地贫, 52例疑为β地贫。在39例疑为α-地贫中经基因检测确诊38例,未确诊1例(可能是检测的基因型种类有限或实验误差引起),α地贫检出率为4.75%(38/800),具体结果见表1。在52例疑为β地贫经基因检测确诊也为52例,β地贫检出率为6.50%(52/800),具体结果见表2。α地贫与β地贫总共确诊90例,总的地贫检出率为11.25%(90/800),在52例被确定β地贫基因型的样品中,有3 例检出为β地贫复合α地贫,检出率为0.38%(3/800)。其中2中例基因型为CD41-42 (-TTCT)/复合--SEA/αα,1例基因型为CD41-42 (-TTCT)/复合-α3.7/αα。
2.2 产前诊断:已确诊有地贫的90例孕妇中,同时检测其丈夫携带地贫基因情况,结果有80例未检出携带地贫基因,有10例检出携带有地贫基因,检出率为11.11%,其中:夫妇俩属不同型地贫3对(其中2对男为α地贫、女为β地贫;另1对男为β地贫、女为α地贫),不符合地贫产前诊断指征,其胎儿不需做产前诊断;属同型地贫7对(4对均为β地贫、3对均为α地贫),其中一对双方均为静止型α地贫夫妇不符合地贫产前诊断指征,其胎儿没被列为做产前诊断对象,其余6对夫妇均符合地贫产前诊断指征,在医生的建议下,先后都接受了对其胎儿做地贫产前基因诊断,具体结果见表3。共检出2例重型地贫,生育重型地贫的机率为33.33%,对所有产前诊断胎儿均进行追踪随访,结果与产前诊断结果相符。
3 讨论
α 地贫筛查以往通常用新生儿脐带血定量检测HbBart’s进行初筛,而本次检测对象为成年人,只能选取外周血进行初筛,经检测红细胞MCV和血红蛋电游泳筛出可疑者,再经基因分析确诊。本次调查α地贫的检出率为4.75%,轻型α地贫由于绝大多数外周血红细胞MCV<79fl和血红蛋电游泳的HbA2≤2.5%,不易漏筛,而检出率较高,为 3.75%,可以说检测结果比较可靠;中间型α地贫即HbH 病,用血红蛋白电泳即可正确诊断[2],几乎无漏筛现象,但由于HbH 病是严重影响生存质量的疾病,患此病者有相当部分因无劳动能力难以成婚,本次调查在孕妇中未见到;静止型α地贫由于多数外周血红细胞MCV和血红蛋电游泳正常,容易漏筛,而致检出率低下,为1.00%,由此看出成人α地贫检出率应比实际患病率低。本次β地贫检出率6.50%,因β地贫外周血有红细胞MCV<79fl,血红蛋白电泳HbA2>3.5% 或同时有HbF>3%;或HbA2正常或相对减少,但HbF>3%等特点。本次调查采用MCV和血红蛋电泳联合初筛,提高了灵敏度,防止了漏筛,加上采用基因分析确诊,本次β地贫检测结果应比较可靠。
本次检测地贫基因结果显示,α地贫共检出6种基因型,以轻型——SEA /αα为主,检出率为3.38%,在构成比中,静止型以-α3.7/αα居多,轻型以——SEA /αα居多,其构成比分别789%、71.05%,缺失型α地贫占92.24%,非缺失型α地贫占776%,检出基因型为HbCS、HbQS。β地贫调查结果有七种基因型,以CD41-42(-TTCT)居多,检出率为2.88%。其中最常见的基因型为CD41-42(-TTCT)、CD17(A→T)和IVS-II-654(C→T),占突变基因的构成比合计达84.61%,β地贫复合α地贫检出率为0.38%,,以CD41-42(-TTCT)/复合——SEA/αα多见。
地贫是单基因遗传性疾病,通过遗传作用可传给子代,符合地贫产前诊断指征的夫妇,按照孟德尔遗传规律,均有理论值高达25%的风险率可能生育重型地贫的机会。如果孕育的是重型α地贫胎儿(Hb Bart’S水肿胎),多在妊娠末期胎死腹中或产下即死,这会给孕育夫妇带来极大的精神负担;如果孕育的是重型β地贫患儿,一般在出生后4-6月发病,并伴有严重的贫血,为维持生命,常采用输血治疗,但长期购血所花费的费用很大,且患儿多在童年时期夭折,最终落得人财两空,给家庭和社会带来巨大的负担。由于此病无法根治,预防就显得更加重要了,在高发地区,进行人群筛查,若发现双方同为地贫携带者又有可能生育重型地贫患儿的夫妻,建议对其胎儿做产前诊断,如查出为重型地贫胎儿,就及时终止妊娠,防止重型地贫儿出生,便成了必要且可行的方法。在已确诊有地贫的90例孕妇中,同时检测其丈夫携带地贫基因情况,结果有80例未检出地贫,有10例检出携带有地贫基因,其中6对夫妇符合地贫产前诊断指征,在医生的建议下,先后都接受了对其胎儿做地贫产前基因诊断,结果检出重型地贫胎儿2例,生育重型地贫儿的机率为3333%,比理论值还高,依据检出结果,终止了重型地贫胎儿的妊娠,有效避免了重型地贫儿的出生。
由于我国取消了强制性婚检,全国各地婚查率急聚下降,随
着婚检这个优生优育第一关作用的变小,那么产前筛查这个优生优育第二关就显得尤为关键和重要,因此,本次调查选择了在妊娠妇女中进行地贫筛查,经过筛查虽然静止型α地贫存在漏筛现象,但总的地贫检出率仍高达11.25%。由于男女患地贫机率均等[3],在90例男性中检出地贫为11.11%,与女性地贫检出结果接近,可以说桂林市实际为育龄人群地贫高发区。由
此看来,桂林市应把好优生优育第二关,必须进行大面积的地贫产前筛查,为产前诊断提供可靠的资料,以有效地防止重型地贫患儿出生。
参考文献
[1] 李坚,廖灿,钟惠珠,等. 大人群地中海贫血产前筛查及产前诊断结果[J]. 热带医学杂志,2005,5(6):785
[2] 张新华,周英杰,李平萍,等. 广西南宁市农村育龄人群地中海贫血筛查及基因型和血液学参数分析[J].中华流行病学杂志,2006,27(9):771
[3] 邓俊耀,龙安翼,李慧,等.桂林市城镇育龄人群地中海贫现况调查[J].中华流行病学杂志,2009,30(2):158
作者单位:541001 桂林市妇女儿童医院生殖医学中心 桂林
【摘要】目的:了解桂林市妊娠妇女中地贫的发病情况,做好优生优育工作。方法:我们对800例妊娠妇女进行了地贫筛查及基因检测,并对符合地贫产前诊指征的夫妇进行了产前诊断。结果:在800例血样品中共检出地贫90例,检出率为11.25%。α地贫检出率为4.75%,其中静止型α地贫以-α3.7/αα居多,轻型α地贫以--SEA /αα居多,缺失型α地贫占92.24%,非缺失型α地贫占7.76%;β地贫检出率为6.50%,其中以CD41-42(-TTCT)居多,以3种基因型CD41-42 (-TTCT)、CD17(A→T)和IVS-II-654(C→T) 为最常见,占突变基因的构成比合计达84.61%,在52例被确定β地贫基因型的样品中,有3 例检出为β地贫复合α地贫,检出率为0.38%,6对符合地贫产前诊断指征的夫妇,均接受了对其胎儿做产前诊断,共检出2例重型地贫胎儿。结论:桂林市实际为育龄人群地贫高发区。必须进行地贫筛查,以防止重型地贫患儿。
【关键词】妊娠妇女;地中海贫;筛查;产前诊断
地中海贫血(简称地贫)是由珠蛋白基因缺失或突变导致肽链合成障碍而引起的溶血性贫血,是南方地区患病率最高的人类单基因遗传病之一。其重型地贫会给家庭和社会带来极大的危害。由于此病目前尚无根治的好方法。因此,防止重型地贫儿的出生就成了最有效的方法[1],这种方法通常是在高发地区进行人群的筛查,若发现双方同为地贫携带者又有可能生育重型地贫患儿的夫妇,建议对其胎儿做产前诊断,如查出为重型地贫胎儿,及时地终止妊娠来实现,为了解桂林市妊娠妇女中地贫的发病情况,做好优生优育工作。我们对800例妊娠妇女进行了地贫筛查及基因检测,现将调查结果报道如下:
1 对象与方法
1.1 对象:桂林市内 5个城区人口,2008年1 月至12 月,来我院做产前检查的孕妇,年龄20-35岁,共800 人。
1.2 标本采集:采集早晨空腹静脉血液2ml于含EDTA-K2的真空采血管内,2小时内检测MCV,剩余血妥善保管留做血红蛋电泳及基因分析。
1.3 仪器:SystemKX-21自动血细胞分析仪(日本),Sebia全自动血红蛋白电泳仪(法国),AmpGene Syetem-DNA ThermalCyeler4800(美国)。
1.4 试剂:血球分析试剂:日本 SystemKX-21自动血细胞分析仪原装配套进口试剂;血红蛋白电泳试剂:法国Sebia全自动血泳仪原装配套进口试剂;地贫基因检测试剂: α地贫能检测3种常见缺失型a地贫基因(--SEA/ 、-α3.7/、-α4.2/),3种非缺失突变型α地贫基因(HbCS, HbQS、HbWS);β地贫能检测17种β地贫基因型[CD41-42(-TTCT)、CD43(A→T)、IVS-II-654(C→T)、-28(A→G)、-29(A→G)、-30(T→C)、-32(C→A)、CD71-72(+A)、βE(GAG→AAG)、CD17(A→T)、CD14-15(+G)、CD31(-C)、CD27-28(+C)、IVS-I-1(G→A,G→T)、IVS-1 -5(G→C)、CAP+1(A→C)、initiation codon(ATG→AGG)],均采用PCR-反向斑点杂交技术(RDB)分析,由深圳亚能生物技有限公司提供。
1.5 方法:先按照SystemKX-21自动血细胞分析仪和Sebia全自动血红蛋白电泳仪的标准操作程序,检测红细胞MCV和血红蛋白电泳,联合进行地贫筛查,结果判断:①若MCV>79 fl,HbA和HbA2量正常,则视为地中海贫血筛查正常;②若MCV<79 fl,HbA和HbA2量正常,且检测血清铁蛋白量正常,则不考虑地中海贫血;③若MCV<79 fl,HbA2≤2.5%,则疑为α地中海贫血;④若MCV<79 fl,HbA2>3.5%或同时有HbF>3%;或HbA2正常,但HbF>3%,则疑为β地中海贫血或β地中海贫血与α地中海贫血复合型。③、④进一步做按地贫基因检测相关标准程序检测α-地贫基因和β-地贫基因,以检出地贫基因来确诊地贫。同时对所有已确定β地贫基因的样品均再进行α地贫基因分析,以诊断β地贫复合α地贫。
1.6 产前诊断:对于确诊有地贫的孕妇,同时检测其丈夫携带地贫基因情况,若发现符合如下地贫产前诊断指征: ①夫妻双方均为轻型α地贫基因携带者;②夫妻双方均为β地贫基因携带者;③夫妇一方为轻型α地贫基因携带者,另一方为轻型β地贫复合轻型α地贫基因携带者;④夫妇一方为轻型α地贫基因携带者,另一方为中间型α地贫基因携带者。在遵循知情同意的原则的情况下,建议对其胎儿进行产前地贫诊断。做产前诊断时,在孕早期取绒毛或羊水作地贫基因诊断;怀孕超过22周则可通过B超下脐静脉穿刺抽取胎血进行地贫基因诊断。
1.7 统计学分析:采用SPSS10.0统计软件对实验数据进行分析。
2 结果
2.1 α和β地贫检出结果:在800例血样品中,共筛出39例疑为α地贫, 52例疑为β地贫。在39例疑为α-地贫中经基因检测确诊38例,未确诊1例(可能是检测的基因型种类有限或实验误差引起),α地贫检出率为4.75%(38/800),具体结果见表1。在52例疑为β地贫经基因检测确诊也为52例,β地贫检出率为6.50%(52/800),具体结果见表2。α地贫与β地贫总共确诊90例,总的地贫检出率为11.25%(90/800),在52例被确定β地贫基因型的样品中,有3 例检出为β地贫复合α地贫,检出率为0.38%(3/800)。其中2中例基因型为CD41-42 (-TTCT)/复合--SEA/αα,1例基因型为CD41-42 (-TTCT)/复合-α3.7/αα。
2.2 产前诊断:已确诊有地贫的90例孕妇中,同时检测其丈夫携带地贫基因情况,结果有80例未检出携带地贫基因,有10例检出携带有地贫基因,检出率为11.11%,其中:夫妇俩属不同型地贫3对(其中2对男为α地贫、女为β地贫;另1对男为β地贫、女为α地贫),不符合地贫产前诊断指征,其胎儿不需做产前诊断;属同型地贫7对(4对均为β地贫、3对均为α地贫),其中一对双方均为静止型α地贫夫妇不符合地贫产前诊断指征,其胎儿没被列为做产前诊断对象,其余6对夫妇均符合地贫产前诊断指征,在医生的建议下,先后都接受了对其胎儿做地贫产前基因诊断,具体结果见表3。共检出2例重型地贫,生育重型地贫的机率为33.33%,对所有产前诊断胎儿均进行追踪随访,结果与产前诊断结果相符。
3 讨论
α 地贫筛查以往通常用新生儿脐带血定量检测HbBart’s进行初筛,而本次检测对象为成年人,只能选取外周血进行初筛,经检测红细胞MCV和血红蛋电游泳筛出可疑者,再经基因分析确诊。本次调查α地贫的检出率为4.75%,轻型α地贫由于绝大多数外周血红细胞MCV<79fl和血红蛋电游泳的HbA2≤2.5%,不易漏筛,而检出率较高,为 3.75%,可以说检测结果比较可靠;中间型α地贫即HbH 病,用血红蛋白电泳即可正确诊断[2],几乎无漏筛现象,但由于HbH 病是严重影响生存质量的疾病,患此病者有相当部分因无劳动能力难以成婚,本次调查在孕妇中未见到;静止型α地贫由于多数外周血红细胞MCV和血红蛋电游泳正常,容易漏筛,而致检出率低下,为1.00%,由此看出成人α地贫检出率应比实际患病率低。本次β地贫检出率6.50%,因β地贫外周血有红细胞MCV<79fl,血红蛋白电泳HbA2>3.5% 或同时有HbF>3%;或HbA2正常或相对减少,但HbF>3%等特点。本次调查采用MCV和血红蛋电泳联合初筛,提高了灵敏度,防止了漏筛,加上采用基因分析确诊,本次β地贫检测结果应比较可靠。
本次检测地贫基因结果显示,α地贫共检出6种基因型,以轻型——SEA /αα为主,检出率为3.38%,在构成比中,静止型以-α3.7/αα居多,轻型以——SEA /αα居多,其构成比分别789%、71.05%,缺失型α地贫占92.24%,非缺失型α地贫占776%,检出基因型为HbCS、HbQS。β地贫调查结果有七种基因型,以CD41-42(-TTCT)居多,检出率为2.88%。其中最常见的基因型为CD41-42(-TTCT)、CD17(A→T)和IVS-II-654(C→T),占突变基因的构成比合计达84.61%,β地贫复合α地贫检出率为0.38%,,以CD41-42(-TTCT)/复合——SEA/αα多见。
地贫是单基因遗传性疾病,通过遗传作用可传给子代,符合地贫产前诊断指征的夫妇,按照孟德尔遗传规律,均有理论值高达25%的风险率可能生育重型地贫的机会。如果孕育的是重型α地贫胎儿(Hb Bart’S水肿胎),多在妊娠末期胎死腹中或产下即死,这会给孕育夫妇带来极大的精神负担;如果孕育的是重型β地贫患儿,一般在出生后4-6月发病,并伴有严重的贫血,为维持生命,常采用输血治疗,但长期购血所花费的费用很大,且患儿多在童年时期夭折,最终落得人财两空,给家庭和社会带来巨大的负担。由于此病无法根治,预防就显得更加重要了,在高发地区,进行人群筛查,若发现双方同为地贫携带者又有可能生育重型地贫患儿的夫妻,建议对其胎儿做产前诊断,如查出为重型地贫胎儿,就及时终止妊娠,防止重型地贫儿出生,便成了必要且可行的方法。在已确诊有地贫的90例孕妇中,同时检测其丈夫携带地贫基因情况,结果有80例未检出地贫,有10例检出携带有地贫基因,其中6对夫妇符合地贫产前诊断指征,在医生的建议下,先后都接受了对其胎儿做地贫产前基因诊断,结果检出重型地贫胎儿2例,生育重型地贫儿的机率为3333%,比理论值还高,依据检出结果,终止了重型地贫胎儿的妊娠,有效避免了重型地贫儿的出生。
由于我国取消了强制性婚检,全国各地婚查率急聚下降,随
着婚检这个优生优育第一关作用的变小,那么产前筛查这个优生优育第二关就显得尤为关键和重要,因此,本次调查选择了在妊娠妇女中进行地贫筛查,经过筛查虽然静止型α地贫存在漏筛现象,但总的地贫检出率仍高达11.25%。由于男女患地贫机率均等[3],在90例男性中检出地贫为11.11%,与女性地贫检出结果接近,可以说桂林市实际为育龄人群地贫高发区。由
此看来,桂林市应把好优生优育第二关,必须进行大面积的地贫产前筛查,为产前诊断提供可靠的资料,以有效地防止重型地贫患儿出生。
参考文献
[1] 李坚,廖灿,钟惠珠,等. 大人群地中海贫血产前筛查及产前诊断结果[J]. 热带医学杂志,2005,5(6):785
[2] 张新华,周英杰,李平萍,等. 广西南宁市农村育龄人群地中海贫血筛查及基因型和血液学参数分析[J].中华流行病学杂志,2006,27(9):771
[3] 邓俊耀,龙安翼,李慧,等.桂林市城镇育龄人群地中海贫现况调查[J].中华流行病学杂志,2009,30(2):158
作者单位:541001 桂林市妇女儿童医院生殖医学中心 桂林