探讨间歇性碱刺激对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的影响及其机制。

体外分离培养大鼠VSMC，将传代培养至第4代的细胞按随机数字表法分为正常对照组、高磷＋pH7.4组、高磷＋pH7.5组、高磷＋pH7.6组和高磷＋pH7.7组。正常对照组采用含10%胎牛血清的培养基培养，其他各组采用含10 mmol/L β－甘油磷酸的高磷培养基培养，然后分别加入7.4% NaHCO₃调整pH值为7.4、7.5、7.6和7.7。干预4 h后，正常对照组更换正常培养基，其余4组的培养基均更换为高磷基础上pH值为7.4的培养基，然后隔1 d更换培养基1次。干预4 d后，分别应用RT－PCR和Western blot检测VSMC的L型钙通道(LTCC)β₃亚基和Runt相关转录因子2(Runx2)mRAN和蛋白的表达水平；干预4 d后，应用钙离子探针Fluo－3/AM检测VSMC内钙离子水平；干预14 d后，应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定碱性磷酸酶(ALP)活性；干预14 d后，通过测量钙含量观察细胞钙化程度。

(1)与正常对照组比较，高磷＋pH7.4组LTCC β₃亚基mRNA和蛋白表达水平均较高(分别为0.49±0.03比0.23±0.02和0.45±0.03比0.26±0.02，P均<0.05)；与高磷＋pH7.4组比较，高磷＋pH7.5组LTCC β₃亚基mRNA(0.86±0.05)和蛋白(0.62±0.04)表达水平均较高(P均<0.05)；与高磷＋pH7.5组比较，高磷＋pH7.6组LTCC β₃亚基mRNA(0.99±0.05)和蛋白(0.80±0.03)表达水平均较高(P均<0.05)；与高磷＋pH7.6组比较，高磷＋pH7.7组LTCC β₃亚基mRNA(1.16±0.05)和蛋白(0.93±0.03)表达水平均较高(P均<0.05)。(2)与正常对照组比较，高磷＋pH7.4组细胞内钙离子水平较高(124.61±6.06比75.68±7.82，P<0.05)；与高磷＋pH7.4组比较，高磷＋pH7.5组细胞内钙离子水平较高(210.85±9.75，P<0.05)；与高磷＋pH7.5组比较，高磷＋pH7.6组细胞内钙离子水平较高(298.44±11.42，P<0.05)；与高磷＋pH7.6组比较，高磷＋pH7.7组细胞内钙离子水平较高(401.13±11.41，P<0.05)。(3)与正常对照组比较，高磷＋pH7.4组Runx2 mRNA、蛋白表达水平和ALP活性均较高(分别为0.60±0.04比0.34±0.03、0.42±0.04比0.21±0.02、67.2±4.3比23.2±2.3，P均<0.05)；与高磷＋pH7.4组比较，高磷＋pH7.5组Runx2 mRNA(0.76±0.05)、蛋白(0.68±0.03)表达水平和ALP活性(102.1±5.4)均较高(P均<0.05)；与高磷＋pH7.5组比较，高磷＋pH7.6组Runx2 mRNA(0.90±0.05)、蛋白(0.90±0.05)表达水平和ALP活性(139.3±4.9)均较高(P均<0.05)；与高磷＋pH7.6组比较，高磷＋pH7.7组Runx2 mRNA(1.11±0.05)、蛋白(1.08±0.06)表达水平和ALP活性(197.0±6.7)均较高(P均<0.05)。(4)与正常对照组比较，高磷＋pH7.4组钙含量较高[(75.4±4.3)mg/g蛋白比(25.2±2.1)mg/g蛋白，P<0.05]；与高磷＋pH7.4组比较，高磷＋pH7.5组钙含量较高[(100.8±5.7)mg/g蛋白，P<0.05]；与高磷＋pH7.5组比较，高磷＋pH7.6组钙含量较高[(143.5±6.1)mg/g蛋白，P<0.05]；与高磷＋pH7.6组比较，高磷＋pH7.7组钙含量较高[(205.1±8.2)mg/g蛋白，P<0.05]。

间歇性碱刺激可促进高磷诱导的大鼠VSMC钙化，可能是通过促进LTCC β₃亚基表达，增加钙离子内流，从而促使VSMC发生表型转化来实现。