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摘要：目的 建立调经化瘀丸的质量标准。方法 采用薄层色谱法对香附、当归、川芎进行定性鉴别。采用高效液相色谱法测定赤芍中芍药苷，YMC-Pack ODS-A色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m），乙腈-0.1%磷酸（14∶86）为流动相，检测波长为230 nm，流速为1.0 mL/min。结果 薄层色谱鉴别斑点清晰、分离度好、阴性无干扰。芍药苷在0.15～1.50 ?g范围线性关系良好，平均回收率为96.4%，RSD=1.1%。结论 该方法简便快速，结果准确，重复性好，可有效控制调经化瘀丸的质量。
关键词：调经化瘀丸；香附；当归；川芎；薄层色谱法；芍药苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）07-0046-03
调经化瘀丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第一册，由香附（醋制）、艾叶（炭）、当归、地黄、川芎、赤芍、桃仁、红花、三棱（醋制）、莪术（醋制）、干漆（炭）共11味中药组成，具有调经行血、理气化瘀的功效，用于气滞血瘀引起的经血不调、行经腹痛或经闭不通等症。原标准对该药仅有一般项目的检查，缺少定性鉴别和含量测定。处方中的主药赤芍能清热凉血、散瘀止痛，其主要成分为芍药苷。考虑芍药苷的测定方法较成熟[1]，在药品质量控制中容易实现。因此，本试验选择了赤芍主要成分芍药苷作为定量检测的指标，同时增加了香附、当归和川芎作为薄层色谱鉴别的标准。
1 仪器与试药
岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪；ClasVP工作站；CAMAG REPROSTAR3薄层照相系统；KUDOS SK8200LH超声清洗器。
阿魏酸对照品（批号0773-9910）、香附对照药材（批号0005110228）、当归对照药材（批号1059-9902）、川芎对照药材（批号120918-200608）、芍药苷对照品（批号110736-200525）均由中国药品生物制品检定所提供。调经化瘀丸由天津乐仁堂制药厂生产（批号080201、080202、080203），药材均采购于天津市药材公司，经乐仁堂制药厂中心化验室依据2010年版《中华人民共和国药典》（一部）检测合格。甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为自制去离子水。
2 方法与结果
2.1 香附的薄层鉴别
取本品粉末1 g，加乙醚5 mL，时时振摇1 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5 mL溶解，作为供试品溶液。缺香附的阴性样品1 g，同法制成阴性样品溶液。取香附对照药材粉末1 g，加乙醚5 mL，放置1 h，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5 mL溶解，作为香附对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各6 ?L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以苯-乙酸乙酯-冰醋酸（92∶5∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（254 nm）检视[2]241。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照则无此斑点，说明该方法专属、可靠。
2.2 当归和川芎的薄层鉴别
取本品粉末3 g，加1%的碳酸氢钠溶液50 mL，超声处理10 min，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺当归、川芎的阴性样品3 g研匀，照供试品溶液的制备方法制备双阴性样品溶液。取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸（4∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（365 nm）检视[2]124。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，而双阴性对照则无此斑点，说明该方法专属、可靠。
2.3 芍药苷含量测定
2.3.2 对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品适量，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含芍药苷0.15 mg的溶液，即得。
2.3.3 供试品溶液的制备 取不同批号本品粉末（过80目筛）约1.0 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，摇匀，称重，超声（功率250 W，频率330 kHz）处理30 min，取出，放冷，再称重，并补足减失量，摇匀，0.45 ?m滤膜滤过，即得。
2.3.4 阴性对照溶液的制备 按处方、工艺，除去赤芍制备阴性样品，再将阴性样品粉碎成细粉，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.3.5 系统适应性试验 分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各5 ?L，注入高效液相色谱仪，测定结果见图1。在芍药苷对照品色谱峰相应的保留时间内，阴性样品无色谱峰出现，表明其他药味对测定无影响。
2.3.7 精密度试验 取同一份供试品溶液（批号080201）连续进样6次，每次5 ?L，测定其中的芍药苷峰面积，测定RSD=0.51%。
2.3.8 重复性考察 取同一批样品（批号080201）6份，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，每一份样品溶液进样2次，取其峰面积的平均值，测定芍药苷含量的RSD=0.73%。
2.3.9 稳定性考察 取同一供试品溶液（批号080201），每隔2 h进样1次（即在0、2、4、6、8、10 h进样），连续进样6次，进行测定，RSD=0.46%，表明供试品在10 h内稳定性良好。
3 讨论
关键词：调经化瘀丸；香附；当归；川芎；薄层色谱法；芍药苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）07-0046-03
调经化瘀丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第一册，由香附（醋制）、艾叶（炭）、当归、地黄、川芎、赤芍、桃仁、红花、三棱（醋制）、莪术（醋制）、干漆（炭）共11味中药组成，具有调经行血、理气化瘀的功效，用于气滞血瘀引起的经血不调、行经腹痛或经闭不通等症。原标准对该药仅有一般项目的检查，缺少定性鉴别和含量测定。处方中的主药赤芍能清热凉血、散瘀止痛，其主要成分为芍药苷。考虑芍药苷的测定方法较成熟[1]，在药品质量控制中容易实现。因此，本试验选择了赤芍主要成分芍药苷作为定量检测的指标，同时增加了香附、当归和川芎作为薄层色谱鉴别的标准。
1 仪器与试药
岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪；ClasVP工作站；CAMAG REPROSTAR3薄层照相系统；KUDOS SK8200LH超声清洗器。
阿魏酸对照品（批号0773-9910）、香附对照药材（批号0005110228）、当归对照药材（批号1059-9902）、川芎对照药材（批号120918-200608）、芍药苷对照品（批号110736-200525）均由中国药品生物制品检定所提供。调经化瘀丸由天津乐仁堂制药厂生产（批号080201、080202、080203），药材均采购于天津市药材公司，经乐仁堂制药厂中心化验室依据2010年版《中华人民共和国药典》（一部）检测合格。甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为自制去离子水。
2 方法与结果
2.1 香附的薄层鉴别
取本品粉末1 g，加乙醚5 mL，时时振摇1 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5 mL溶解，作为供试品溶液。缺香附的阴性样品1 g，同法制成阴性样品溶液。取香附对照药材粉末1 g，加乙醚5 mL，放置1 h，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5 mL溶解，作为香附对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各6 ?L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以苯-乙酸乙酯-冰醋酸（92∶5∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（254 nm）检视[2]241。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照则无此斑点，说明该方法专属、可靠。
2.2 当归和川芎的薄层鉴别
取本品粉末3 g，加1%的碳酸氢钠溶液50 mL，超声处理10 min，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺当归、川芎的阴性样品3 g研匀，照供试品溶液的制备方法制备双阴性样品溶液。取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸（4∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（365 nm）检视[2]124。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，而双阴性对照则无此斑点，说明该方法专属、可靠。
2.3 芍药苷含量测定
2.3.2 对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品适量，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含芍药苷0.15 mg的溶液，即得。
2.3.3 供试品溶液的制备 取不同批号本品粉末（过80目筛）约1.0 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，摇匀，称重，超声（功率250 W，频率330 kHz）处理30 min，取出，放冷，再称重，并补足减失量，摇匀，0.45 ?m滤膜滤过，即得。
2.3.4 阴性对照溶液的制备 按处方、工艺，除去赤芍制备阴性样品，再将阴性样品粉碎成细粉，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.3.5 系统适应性试验 分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各5 ?L，注入高效液相色谱仪，测定结果见图1。在芍药苷对照品色谱峰相应的保留时间内，阴性样品无色谱峰出现，表明其他药味对测定无影响。
2.3.7 精密度试验 取同一份供试品溶液（批号080201）连续进样6次，每次5 ?L，测定其中的芍药苷峰面积，测定RSD=0.51%。
2.3.8 重复性考察 取同一批样品（批号080201）6份，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，每一份样品溶液进样2次，取其峰面积的平均值，测定芍药苷含量的RSD=0.73%。
2.3.9 稳定性考察 取同一供试品溶液（批号080201），每隔2 h进样1次（即在0、2、4、6、8、10 h进样），连续进样6次，进行测定，RSD=0.46%，表明供试品在10 h内稳定性良好。
3 讨论