【摘 要】
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构建Shcbp1慢病毒干扰载体,探究SHCBP1在黑色素瘤B16细胞中的生物学功能.通过设计靶向干扰小鼠Shcbp1基因的shRNA-1和shRNA-2以及对照序列shRNA-NC,连接至慢病毒骨架载体,利用HEK293T细胞包装慢病毒颗粒,侵染B16细胞,检测干扰效率,并通过CCK-8和流式细胞术检测细胞活力和细胞周期.利用Western Blot检测增殖相关基因的表达.结果显示:敲低Shcbp1显著抑制B16细胞增殖;流式细胞术检测结果发现,敲低Shcbp1将B16细胞阻滞在G1期;ERK1/2的磷酸
【机 构】
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陕西理工大学 生物科学与工程学院,汉中723000
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构建Shcbp1慢病毒干扰载体,探究SHCBP1在黑色素瘤B16细胞中的生物学功能.通过设计靶向干扰小鼠Shcbp1基因的shRNA-1和shRNA-2以及对照序列shRNA-NC,连接至慢病毒骨架载体,利用HEK293T细胞包装慢病毒颗粒,侵染B16细胞,检测干扰效率,并通过CCK-8和流式细胞术检测细胞活力和细胞周期.利用Western Blot检测增殖相关基因的表达.结果显示:敲低Shcbp1显著抑制B16细胞增殖;流式细胞术检测结果发现,敲低Shcbp1将B16细胞阻滞在G1期;ERK1/2的磷酸化水平降低,P21的表达水平升高.结果表明SHCBP1可能通过ERK1/2信号通路抑制P21的转录,加速B16细胞从G1到S期进程.
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