【摘 要】
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目的 探讨脂肪干细胞(ASC)来源的外泌体在白色脂肪棕色化中的作用.方法 分离培养并鉴定小鼠ASC细胞;慢病毒转染构建过表达miR-27的ASC细胞;超高速离心提取正常及过表达miR-27
【机 构】
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南昌大学第二附属医院检验科 330006江西省分子医学重点实验室;南昌大学第二附属医院检验科 330006;江西省妇幼保健院产前诊断中心;南昌大学第一附属医院检验科;
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目的 探讨脂肪干细胞(ASC)来源的外泌体在白色脂肪棕色化中的作用.方法 分离培养并鉴定小鼠ASC细胞;慢病毒转染构建过表达miR-27的ASC细胞;超高速离心提取正常及过表达miR-27的ASC细胞分泌的外泌体,实时荧光定量核酸扩增(qRT-PCR)分析外泌体中miR-27的表达量;高脂喂食构建肥胖小鼠模型,分别注射过表达miR-27外泌体(过表达组)、正常ASC外泌体(正常表达组)及生理盐水(对照组),在寒冷暴露条件下监测体质量变化;剥离小鼠附睾皮下脂肪组织和肩胛骨脂肪组织,比较组织大小,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测解偶联蛋白1(UCP1)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)、含PR结构域的锌指蛋白16(PRDM16)、过氧化物酶体增殖子激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的表达.结果 成功提取ASC及其外泌体,并成功转染miR-27;ASC及其外泌体中的miR-27显著高于白色脂肪组织(P<0.05).与对照组相比,过表达组及正常表达组的小鼠体质量下降幅度小,随时间的增加效果更加明显(P<0.05).过表达组及正常表达组的小鼠的附睾皮下脂肪组织较对照组的小鼠要稍大;而肩胛骨脂肪组织的大小无明显变化.正常表达组与过表达组的UCP1、PPARγ、PRDM16及PGC-1α的表达水平较对照组下降(P<0.05).结论 脂肪干细胞来源外泌体能够抑制白色脂肪细胞的棕色化.
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