复方黄柏液调节AKT/eNOS信号通路对皮肤破损大鼠血管生成和创口愈合的影响

来源 :中国皮肤性病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mimistart
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目的 观察复方黄柏液对皮肤破损大鼠创面细胞因子表达、血管生成和创口愈合的影响,并探讨复方黄柏液促进伤口愈合的机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、复方黄柏液组、复方黄柏液+GSK组(复方黄柏液+GSK-69069320mg/kg),每组12只。构建皮肤缺损大鼠模型后,复方黄柏液组采用复方黄柏液冲洗创面,复方黄柏液+GSK组在用复方黄柏液冲洗创面的同时灌胃GSK-690693,对照组给予等体积无菌生理盐水冲洗创面和灌胃,1次/d,连续干预21d。在干预后第7、14和21d观察创面恢复情况,计算伤口愈合率;HE染色观察伤口组织病理学变化,并计算再上皮化率;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10水平;免疫荧光染色法检测血管生成;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测伤口组织中血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)-2、表皮生长因子(EGF)、I型胶原α2(COL1α2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的mRNA表达;蛋白质印迹(Westernblot)检测伤口组织中蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达。结果 与对照组相比,复方黄柏液组大鼠伤口愈合速度较快,伤口愈合率、再上皮化率、血清IL-10水平[(187.25±20.39)vs(65.43±8.21)]pg/mL、CD31阳性细胞率[(25.20±3.03)vs(5.38±0.76)]%、伤口组织VEGF[(5.92±0.67)vs(1.00±0.00)]、FGF-2[(4.45±0.52)vs(1.00±0.00)]、EGF[(3.21±0.36)vs(1.00±0.00)]、COL1α2的mRNA水平[(5.30±0.61)vs(1.00±0.00)]和p-AKT/AKT[(0.51±0.06)vs(0.18±0.03)]、p-eNOS/eNOS比值[(0.64±0.07)vs(0.23±0.04)]显著升高,血清IL-1β[(147.53±22.09)vs(302.16±35.80)]pg/mL、TNF-α水平[(105.86±17.52)vs(214.35±26.94)]pg/mL、伤口组织MMP-2[(0.42±0.06)vs(1.00±0.00)]和MMP-9[(0.39±0.05)vs(1.00±0.00)]的mRNA水平显著降低(P<0.05);使用AKT抑制剂GSK-690693抑制AKT活化,可抑制eNOS磷酸化,并显著减弱复方黄柏液的促血管生成和伤口愈合作用(P<0.05)。结论 复方黄柏液可能通过激活AKT/eNOS通路,促进血管生成,加速皮肤伤口组织修复。
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