【摘 要】
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目的观察在缺氧和(或)血清饥饿环境中，重组人血管内皮抑素和贝伐珠单抗对人乳腺癌MDA–MB–231细胞侵袭和迁移能力的影响，探讨抗血管生成药物治疗的潜在风险。方法将MDA–MB–231细胞分别置于4种环境培养，分别为营养环境(10%胎牛血清)、缺氧(1%氧气)＋营养环境、饥饿环境(无胎牛血清)和缺氧＋饥饿环境。在每种培养环境中，分别设空白组(未给予抗血管生成药物)、抑素组(给予重组人血管内皮抑素)
【机 构】
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300060天津医科大学肿瘤医院肺部肿瘤内科天津市肿瘤防治重点实验室国家肿瘤临床医学研究中心（现工作单位：221009徐州市中心医院肿瘤内科）,300060天津医科大学肿瘤医院肺部肿瘤内科天津市肿瘤防
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目的观察在缺氧和(或)血清饥饿环境中，重组人血管内皮抑素和贝伐珠单抗对人乳腺癌MDA–MB–231细胞侵袭和迁移能力的影响，探讨抗血管生成药物治疗的潜在风险。
方法将MDA–MB–231细胞分别置于4种环境培养，分别为营养环境(10%胎牛血清)、缺氧(1%氧气)＋营养环境、饥饿环境(无胎牛血清)和缺氧＋饥饿环境。在每种培养环境中，分别设空白组(未给予抗血管生成药物)、抑素组(给予重组人血管内皮抑素)和单抗组(给予贝伐珠单抗)。以CCK–8法计算重组人血管内皮抑素及贝伐珠单抗的细胞生长抑制率，确定其最适工作浓度与时间，并对各组细胞行Transwell细胞侵袭实验和细胞迁移实验，以Western blot检测细胞中c–Met和基质金属蛋白酶9(MMP–9)的表达。对饥饿环境中的处理组细胞行Exiqon miRBase 18.0 microRNA芯片杂交，以实时荧光定量PCR法验证杂交芯片实验中检测到的微小RNA。
结果800 mg/L重组人血管内皮抑素作用48 h和24 h后，细胞抑制率分别为(32.2±2.5)%和(27.0±1.3)%(P＝0.023)；80 mg/L贝伐珠单抗作用48 h和24 h后，细胞抑制率分别为(30.5±1.4)%和(26.1±2.4)%(P＝0.015)。在饥饿环境中，空白组侵袭、迁移穿膜细胞数分别为(28.8±2.2)个和(31.4±1.5)个，与单抗组和抑素组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白组中c–Met和MMP–9蛋白的相对表达量分别为0.213±0.017和0.542±0.048，与单抗组和抑素组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。在缺氧环境中，抑素组侵袭、迁移穿膜细胞数分别为(17.5±2.1)个和(16.5±2.8)个，单抗组分别为(16.3±3.5)个和(17.5±2.4)个，与空白组比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。缺氧对细胞侵袭迁移能力、c–Met和MMP–9的表达亦无影响，差异无统计学意义(均P>0.05)。经实时荧光定量PCR验证，微小RNA中仅miR2355和miR375变化稳定。在饥饿环境中，空白组细胞中miR375和miR2355的相对表达量分别为0.550±0.036和0.852±0.121，与单抗组和抑素组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)；抑素组细胞中miR375和miR2355的相对表达量分别为0.295±0.012和0.253±0.011，单抗组分别为0.234±0.020和0.309±0.022，差异均无统计学意义(均P>0.05)。而在缺氧环境中，药物干预并未影响miR2355和miR375的表达水平(均P>0.05)。
结论血清饥饿环境增加了MDA–MB–231细胞的侵袭、迁移能力；重组人血管内皮抑素和贝伐珠单抗均可能增加侵袭、迁移能力。
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