【摘 要】
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目的 研究小RNA干扰技术靶向沉默周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6) 对喉癌细胞生物学特性的影响.方法 在喉癌细胞中依次转染CDK6 siRNA1和CDK6 siRNA2, 用荧光定量PCR和Western印
【机 构】
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三峡大学第一临床医学院 湖北省宜昌市, 443000宜昌市中心人民医院风湿免疫科 湖北省宜昌市, 443003;
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目的 研究小RNA干扰技术靶向沉默周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6) 对喉癌细胞生物学特性的影响.方法 在喉癌细胞中依次转染CDK6 siRNA1和CDK6 siRNA2, 用荧光定量PCR和Western印迹测定转染效率, 筛选干扰效果较好的CDK6 siRNA2 作为下调CDK6 的小RNA.以CCK-8 法测定细胞的增殖情况, 以流式细胞术测定细胞周期分布情况及细胞凋亡情况, 以Western印迹法测定细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4 (CDK4)、细胞周期蛋白D1 ( CCND1)、剪切型Caspase-3 ( Cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A ( p21) 蛋白水平.结果 CDK6 siRNA1 和 CDK6 siRNA2 都可以下调喉癌细胞中CDK6的转录和表达, 并且CDK6 siRNA2转染后下调水平更多.下调CDK6后的喉癌细胞的增殖能力下降,细胞G1期比例增多, 同时细胞凋亡率也增加, 细胞中周期促进因子CDK4、 CCND1蛋白水平降低, 周期抑制因子p21蛋白水平升高, 细胞中Cleaved Caspase-3水平升高, 与没有转染的细胞比较有显著性差异 (P<0.05).结论 沉默CDK6能够在体外抑制喉癌细胞生长, 阻滞喉癌细胞周期, 诱导喉癌细胞凋亡.
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