【摘 要】
：
目的 观察RNA干扰沉默RRM2基因表达对人肝癌细胞HepG2细胞生物学影响,并探讨其分子机制.方法 利用小RNA干扰(siRNA)技术沉默HepG2细胞中RRM2基因的表达,用采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot技术检测RRM2 mRNA及蛋白的表达；用细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测siRNA-RRM2对HepG2细胞增殖的影响；用Transwe
【机 构】
：
310013杭州,浙江医院普外科,310013杭州,浙江医院普外科,310013杭州,浙江医院普外科,310013杭州,浙江医院普外科
论文部分内容阅读
目的 观察RNA干扰沉默RRM2基因表达对人肝癌细胞HepG2细胞生物学影响,并探讨其分子机制.方法 利用小RNA干扰(siRNA)技术沉默HepG2细胞中RRM2基因的表达,用采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot技术检测RRM2 mRNA及蛋白的表达；用细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测siRNA-RRM2对HepG2细胞增殖的影响；用Transwell细胞迁移系统检测siRNA-RRM2对HepG2细胞迁移能力的影响；采用Western blot技术检测抗凋亡蛋白B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2),促凋亡蛋白bax和细胞色素C(Cyt-C)蛋白水平变化；建立成瘤模型每组10只,观察RRM2基因沉默后对移植瘤生长的影响.结果 siRNA-RRM2有效沉默HepG2细胞中RRM2表达；CCK-8法结果显示与对照组比较下调RRM2基因抑制HepG2增殖[(41.20±2.13)％比(91.35±10.22)％]；Transwell细胞迁移系统检测显示下调RRM2基因后,显著抑制了HepG2的迁移能力(21.20±1.28比132.50±7.88)；Western blot结果显示抗凋亡蛋白bcl-2下调,促凋亡蛋白bax上调,Cyt-C上调；体内实验证实下调RRM2组肿瘤体积明显小于对照组,到第8周时,siRNA-RRM2组肿瘤体积为(171.13 ±28.12) mm3,对照组为(1487.41±168.20) mm3.结论 siRNA-RRM2能显著抑制RRM2基因在人肝癌细胞HepG2中的表达,部分逆转HepG2的恶性生物学行为并明显抑制HepG2在裸鼠体内的成瘤和生长。
其他文献
在关于骨性关节炎软骨下骨的研究中,大鼠膝关节骨关节炎模型最常使用.从细小的大鼠膝关节分离并抽提出高质量的软骨下骨总RNA样品十分困难.我们使用微动力磨钻液氮下打磨分离大鼠膝关节软骨下骨,结合Trizol与硅胶离心柱提取软骨下骨总RNA的纯化方法,是一种简单、可靠、实用的提取完整和高纯度软骨下骨总RNA的新方法。
目的 探讨Notch信号通路在鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡中的作用机制.方法 用鱼藤酮(5 μmol/L)处理PC12细胞,检测PC12细胞的凋亡和Notch信号通路的活化状态.同时以Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT,10 μmol/L)处理上述PC12细胞,观察Notch信号通路抑制后PC12细胞对鱼藤酮处理的凋亡反应,分析
目的 探讨肝细胞癌(HCC)根治术后早期肺转移影响因素及预测的数学模型.方法 对400例根治性切除术的肝细胞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、术前甲胎蛋白(AFP)、合并乙型肝炎病毒( HBV)感染、手术前肿瘤数目、合并肝硬化、肿瘤包膜、镜下脉管癌栓、病理分化分级进行单因素、多因素分析及数学建模.结果 术后1年肺转移发生率为8.0％ (32/400).有无肺转移组在肿瘤大小、术前AFP、镜下脉管癌栓方
目的 观察分化和DNA结合抑制因子1(Id1)基因对人乳腺癌细胞增殖活性以及分泌血管内皮生长因子(VEGF)能力的影响.方法 将正义、反义Id1基因真核表达载体以及空载体分别转染乳腺癌MCF-7细胞株,经潮霉素筛选获得稳定细胞株；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学染色检测Id1 mRNA及Id1蛋白、VEGF蛋白表达；细胞计数、噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪检测细胞增殖活性及细
目的 观察miR-138对结肠癌细胞SW480人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响,探讨miR-138模拟体mimic沉默hTERT在SW480对5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗药物敏感性中的作用.方法 流式细胞仪检测50 nmol/L和10 nmol/L miR-138模拟体(mimic)转染SW480后hTERT的表达；5μl异硫氰酸荧光素(FITC)标记的细胞核增殖抗原(Ki-67)抗体染色
目的 探讨Ghrelin对海人酸(KA)致痫大鼠海马神经元的影响及其与海马内γ-氨基丁酸(GABA)表达变化的相关性.方法 建立大鼠海人酸致痫模型,并注射外源性Ghrelin进行干预.观察大鼠行为学变化,利用苏木素-伊红(HE)染色、尼氏染色观察海马神经元变化,利用免疫荧光检测海马内GABA表达的变化.结果 KA注射后,经过潜伏期后大鼠开始出现癫痫发作,Ghrelin干预组潜伏期(12.3±3.5
RNA干扰(RNAi)是近几年基因表达调控领域的重大发现[1].趋化性细胞因子及其受体在肿瘤的播散和器官特异性转移中发挥着重要的作用[2].趋化因子受体-CXC4(CXCR4)可能是人类肿瘤治疗的1个潜在的靶位,CXCR4基因沉默后能够对食管癌细胞的生长产生明显的抑制作用.我们采用肿瘤局部直接注射CXCR4小干扰RNA(siRNA),检测移植瘤内CXCR4mRNA及蛋白水平,观察CXCR4小干扰R
不管肾上腺肿瘤的大小和所处的位置,传统的治疗总是将肿瘤侧肾上腺全切.近年来不断有学者提倡对肾上腺良性肿瘤实施肾上腺部分切除术,以避免肾上腺皮质功能不全的不良反应发生[1].我们于2010年7月至2012年12月实施22例单侧腹腔镜肾上腺部分切除术,治疗效果满意。
目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)对体外培养的关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响.方法 体外培养SD乳鼠关节软骨细胞,分为4组,每组加入不同处理因素进行干预,A组:(对照组)不加任何处理因素；B组:10 μg/L VEGF;C组:10 μg/L白细胞介素(IL)-1β；D组:10 μg/L VEGF+ 10 μg/L IL-1β.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检
目的 建立成人主动脉血管平滑肌细胞体外培养的有效方法.方法 无菌条件下分离成人主动脉的平滑肌层,剪成1 mm3的碎片,0.1％ Ⅰ型胶原酶预处理1h,组织块贴壁法,以含胎牛血清20％的DMEM低糖培养基培养.倒置显微镜观察培养细胞的形态学特点,免疫荧光法检测平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 培养至4～5d组织块边缘即有少量细胞爬出,呈长梭形,胞质丰富；培养至1～2周组织块边缘细胞融合,