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【摘要】 目的 探讨Syndecan-1分子表达水平与子宫内膜增生症进展与预后的关系。方法 采用免疫组织化学染色技术,检测15例单纯性子宫内膜增生(SH)、15例复杂性子宫内膜增生(CH)、15例非典型增生(AH)、24例子宫内膜癌(EC)组织中Syndecan-1分子的表达,与8例正常子宫内膜(NE)组织中的Syndecan-1表达水平进行比较分析。结果 Syndecan-1在NE、SH、CH、AH、EC中的表达平均分值分别为0.50,0.53,1.27,1.67,1.88。Syndecan-1在CH和AH中的表达显著高于SH(P<0.001),CH、AH、EC中Syndecan-1的表达明显强于NE(P=0.041,P=0.006,P=0.02),而NE中Syndecan-1的表达与SH的比较无差异(P>0.50)。结论 Syndecan-1分子表达增高可能促进子宫内膜的恶性转化,检测Syndecan-1分子表达水平可帮助评估子宫内膜增生症预后。
【关键词】 Syndecan-1;子宫内膜增生症;表达;预后
Relationships Between The Expression of Syndecan-1 and Endometrial Hyperplasia Progression and Prognosis
TAN Yi-jun,GAO Wei-fei.Department of Obstetrics and Gynaecology of Loudi City Traditional Chinese Medical Hospital,LoudiHunan,Loudi 417000,China
【Abstract】 Objective To explore the relationships between the expression of syndecan-1 and endometrial hyperplasia progression and prognosis.Methods With immunohistochemical staining of syndecan-1,we analyzed specimens from patients with normal endometrium (NE,N=8) as controls,and those of simple hyperplasia (SH,N=15),complex hyperplasia without atypia (CH,N=15),atypical hyperplasia (AH,N=15),and endometrial cancer (EC,N=24).Results The mean scores of expression based on the frequency of syndecan-1 staining were 0.50,0.53,1.27,1.67 and 1.88 for NE,SH,CH,AH and EC,respectively (P<0.001).Syndecan-1 expression was significantly greaterin CH (P<0.001) or AH (P<0.001) than in SH.Syndecan-1 is more frequently expressed in CH (P=0.041),AH (P=0.006),or EC (P=0.02) than in NE.Syndecan-1expression did not differ significantly between NE and SH (P>0.50).Conclusion Up-regulated expression of syndecan-1 may promote m alignant transformation of the endometrium and the immunohistochemical study of syndecan-1 expression make for evaluation of prognosis of endometrial hyperplasia.
【Key words】Syndecan-1; Endometrial hyperplasia; Expression; Prognosis
子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)是女性生殖道最常见的肿瘤之一,其发病率和死亡率有逐年上升的趋势。近年研究表明[1],Syndecan-1作为肿瘤微环境的重要调节者,在肿瘤细胞分化、增殖、侵袭转移、血管生成等过程中起重要作用。但Syndeean-1与子宫内膜癌的关系的研究很少,且其在子宫内膜癌的作用及机制亦尚未明了。因此,笔者通过
检测正常子宫内膜(NE)、单纯性子宫内膜增生(SH)、复杂性子宫内膜增生(CH)、非典型增生(AH)、子宫内膜癌(EC)组织中Syndecan-1分子的表达水平,旨在探讨Syndecan-1能否作为一种新的生物学标记来预测子宫内膜增生症的恶性转化。现报告如下。
1 材料与方法
1.1研究对象 选取2004年5月至2009年11月在我院妇产科接受刮宫术或子宫切除术治疗的77例患者,其中单纯性子宫内膜增生(SH)15例、复杂性子宫内膜增生(CH)15例、非典型增生(AH)15例、子宫内膜癌(EC)24例;根据2000年FIGO标准进行手术一病理分期:24例EC患者均为Ⅰ级高分化腺癌。随机选择同期因良性病变切除子宫的正常子宫内膜组织8例作对照。所有病例均未接受放疗或化疗,术前3个月内未用过激素治疗,且有完整的临床和病理资料。
1.2 免疫组化染色 ①将石蜡包埋标本常规制片,每张4 um,贴于多聚-L-赖氨酸防脱玻片上,置于60℃烤箱3 h;②经常规脱蜡、水化,PBS冲洗两次,5 min/次;③滴加3%H2O2,室温静置10 min,蒸馏水洗3次;④滴加正常山羊血清封闭液,室温20 min。甩去多余液体,滴加Ⅰ抗(鼠抗人syndecan-1单克隆抗体,1:400稀释),室温1 h或者4℃过夜或者37℃1 h;⑤甩去1抗,滴加生物素化二抗((SuPerPic Ture聚合物),20℃~37℃20 min;⑥PBS冲洗三次,3 min/次;⑦DAB显色,苏木素复染,PBs冲洗返蓝,脱水、透明、封片、镜检。上述试剂均购至上海翔升生物科技有限公司。
1.3 染色結果判断 对全片进行整体评价,选取染色较为集中的区域进行细胞记数和结果判定,观察10个高倍镜视野,根据每高倍镜视野的阳性染色细胞数分为四组:0,阴性;1,<33%;2,33%~66%;3,>66%。
1.4 统计学分析 所有计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,运用SPSS17.0软件进行数据处理,两样本秩和检验采用Mann-Whitney U检验,多个样本秩和检验采用Kruskal-Wallis法,Fisher’s确切概率法比较分类资料的差异性,P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组一般资料比较 所有患者年龄21~71岁,中位数年龄44岁,其中NE组:平均年龄(42.5±5.1)岁,体质量(59.3±10.5)Kg,1例糖尿病;SH组:平均年龄(44.9±7.7)岁,体质量(60.8±1.2)Kg,2例糖尿病;CH组:平均年龄(40.0±7.6)岁,体质量(64.1±13.8)Kg,1例糖尿病;AH组:平均年龄(41.1±7.1)岁,体质量(65.0±10.2)Kg,2例糖尿病;EC组:平均年龄(47.2±11.7)岁,体质量(64.1±15.3)Kg,1例糖尿病。各组在年龄、体重、糖尿病构成比方面无统计学意义(P>0.05)。
2.2 Syndecan-1在正常子宫内膜、子宫内膜增生症、子宫内膜癌组织中的表达。
NE、SH、CH、AH、EC中Syndecan-1表达的平均分值分別是0.50,0.53,1.27,1.67,1.88,见图1。不同子宫内膜组织中Syndecan-1表达的频数见表1。从表1可以看出,各组Sydecan-1表达有差别(P<0.005),Syndecan-1在CH和AH中的表达显著高于SH(P<0.001),CH、AH、EC中Syndecan-1的表达明显强于NE(P=0.041,P=0.006,P=0.02),而NE中Syndecan-1的表达与SH的比较无差异(P>0.50)。
图1 不同子宫内膜组织中Syndecan-1表达的平均分值
3 讨论
syndecan-1(CD138)属于粘附分子整合素跨膜蛋白聚糖(proteoglyeans,pG)家族成员,多表达于成熟上皮细胞、前B细胞及浆细胞表面,是细胞间质、细胞质膜的重要组成部分,通过其分子表面的硫酸肝素侧链共价结合一系列细胞外配体如细胞粘附分子、基质成分、生长因子、酶和酶抑制物等,以共受体(as cell-surface co-receptors)方式调节细胞与微环境之间的相互关系及细胞行为,参与组织器官分化发育、血管形成、组织再生等一系列生理过程的调节。大量研究证实,当正常细胞恶变后,细胞膜表面Syndecan-1分子的表达异常,与肿瘤的恶性程度、预后相关,并且肿瘤类型不同,其临床意义亦不同,Syndecan-1表达增高与食道癌[2]、喉癌[3]、肝癌[4]、肺癌[5]、结肠癌[6]的组织高分化、异型性小、临床低分期和预后良好有关,与上述肿瘤类型相反,前列腺癌[7]、乳腺癌[8]、甲状腺癌[9]Syndecan-1表达增高提示肿瘤预后不良,说明不同类型肿瘤对Syndecan-1表达水平的改变所表现出的不同反应,提示Syndecan-1功能可能具有组织特异性。
Syndecan-1与子宫内膜癌的关系很少被提及,其在子宫内膜癌的作用及机制尚未明了,因此,本研究主要是针对子宫内膜增生的一系列形态变化,对Syndecan-1表达的临床意义进行评价,因为子宫内膜增生症发展为子宫内膜癌的风险率与细胞的不典型程度有关,Kurman[10]等研究发现,SH约有1%可发展为EC,CH大约3%发展为EC,AH约有29%发展为EC,本组数据发现,根据上述不同子宫内膜组织类型,其Syndecan-1亦有显著性差异,从表1可以看出,各组Sydecan-1表达有差别(P<0.005),Syndecan-1在CH和AH中的表达显著高于SH(P<0.001),CH、AH、EC中Syndecan-1的表达明显强于NE(P=0.041,P=0.006,P=0.02),EC中Syndecan表达明显高于CH(P=0.04),而NE中Syndecan-1的表达与SH的比较无差异(P>0.50)。提示Syndecan-1可作为子宫内膜增生症发展为子宫内膜癌的预警指标。
本研究尚未对Syndecan-1表达与子宫内膜癌的预后及其临床病理分期的关系作出分析,此方面研究尚需进一步扩大样本例数,有待进一步研究。总之,Syndeean-1的表达水平与子宫内膜增生紧密相关,能在一定程度上反映子宫内膜增生的发生发展。
参考文献
[1] 王静,杨洋,罗荣城.Syndecan-1 -肿瘤微环境的重要调节者.肿瘤防治研究,2010,37(1):117-119.
[2] Mikami S,Ohashi K,Usui Y,Nemoto T,et al.Loss of syndecan-1 and increased expression of heparanasein invasive esophageal carcinomas.Jpn J Cancer Res,2001,92:1062-1073.
[3] Pulkkinen JO,Penttinen M,Jalkanen M,Klemi P,Grenman R.Syndecan-1:a new prognostic marker in laryngeal cancer.Acta Otolaryngol,1997,117:312-315.
[4] Harada K,Masuda S,Hirano M,et al.Reduced expression of syndecan-1correlates with histologic dedifferentiation,lymphnode metastasis,and poor prognosis in intrahepatic cholangio-carcinoma.Hum Pathol,2003,34(9):857-863.
[5] Anttonen A,Heikkila P,Kajanti M,Jalkanen M,Joensuu H.High syndecan-1 expression is associated with favourable outcome in squamous cell lung carcinoma treated with radical surgery.Lung Cancer,2001,32:297-305.
[6] Fujiya M,Watari J,Ashida T,Honda M,Tanabe H,Fujiki T,et al.Reduced expression of syndecan-1 affects metastatic potential and clinical outcome in patients with colorectal cancer.Jpn J Cancer Res,2001,92:1074-1081.
[7] Shariat S F,Svatek R S,Kabbani W,et al.Prognostic value of syndecan-1 expression in patients treated with radical prostatectomy.BJU Int,2008,101(2):232-237.
[8] Su G,Blaine S A,Qiao D,et al.Shedding of syndecan-1 by stromal fibroblasts stimulates human breast cancer cell prolif-eration via FGF-2activation.J Biol Chem,2007,282(20):14906-14915.
[9] Ito Y,Yoshida H,Nakano K,Takamura Y,Miya A,Kobayashi K,et al.Syndecan-1 expression in thyroid carcinoma:stromal expression followed by epithelial expression is significantly correlated with dedifferentiation.Histopathology,2003,43:157-164.
[10] Kurman RJ,Kaminski PF,Norris HJ.The behavior of endometrial hyperplasia:a long-term study of "untreated" hyperplasia in 170 patients.Cancer,1985,56:403-412.
【关键词】 Syndecan-1;子宫内膜增生症;表达;预后
Relationships Between The Expression of Syndecan-1 and Endometrial Hyperplasia Progression and Prognosis
TAN Yi-jun,GAO Wei-fei.Department of Obstetrics and Gynaecology of Loudi City Traditional Chinese Medical Hospital,LoudiHunan,Loudi 417000,China
【Abstract】 Objective To explore the relationships between the expression of syndecan-1 and endometrial hyperplasia progression and prognosis.Methods With immunohistochemical staining of syndecan-1,we analyzed specimens from patients with normal endometrium (NE,N=8) as controls,and those of simple hyperplasia (SH,N=15),complex hyperplasia without atypia (CH,N=15),atypical hyperplasia (AH,N=15),and endometrial cancer (EC,N=24).Results The mean scores of expression based on the frequency of syndecan-1 staining were 0.50,0.53,1.27,1.67 and 1.88 for NE,SH,CH,AH and EC,respectively (P<0.001).Syndecan-1 expression was significantly greaterin CH (P<0.001) or AH (P<0.001) than in SH.Syndecan-1 is more frequently expressed in CH (P=0.041),AH (P=0.006),or EC (P=0.02) than in NE.Syndecan-1expression did not differ significantly between NE and SH (P>0.50).Conclusion Up-regulated expression of syndecan-1 may promote m alignant transformation of the endometrium and the immunohistochemical study of syndecan-1 expression make for evaluation of prognosis of endometrial hyperplasia.
【Key words】Syndecan-1; Endometrial hyperplasia; Expression; Prognosis
子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)是女性生殖道最常见的肿瘤之一,其发病率和死亡率有逐年上升的趋势。近年研究表明[1],Syndecan-1作为肿瘤微环境的重要调节者,在肿瘤细胞分化、增殖、侵袭转移、血管生成等过程中起重要作用。但Syndeean-1与子宫内膜癌的关系的研究很少,且其在子宫内膜癌的作用及机制亦尚未明了。因此,笔者通过
检测正常子宫内膜(NE)、单纯性子宫内膜增生(SH)、复杂性子宫内膜增生(CH)、非典型增生(AH)、子宫内膜癌(EC)组织中Syndecan-1分子的表达水平,旨在探讨Syndecan-1能否作为一种新的生物学标记来预测子宫内膜增生症的恶性转化。现报告如下。
1 材料与方法
1.1研究对象 选取2004年5月至2009年11月在我院妇产科接受刮宫术或子宫切除术治疗的77例患者,其中单纯性子宫内膜增生(SH)15例、复杂性子宫内膜增生(CH)15例、非典型增生(AH)15例、子宫内膜癌(EC)24例;根据2000年FIGO标准进行手术一病理分期:24例EC患者均为Ⅰ级高分化腺癌。随机选择同期因良性病变切除子宫的正常子宫内膜组织8例作对照。所有病例均未接受放疗或化疗,术前3个月内未用过激素治疗,且有完整的临床和病理资料。
1.2 免疫组化染色 ①将石蜡包埋标本常规制片,每张4 um,贴于多聚-L-赖氨酸防脱玻片上,置于60℃烤箱3 h;②经常规脱蜡、水化,PBS冲洗两次,5 min/次;③滴加3%H2O2,室温静置10 min,蒸馏水洗3次;④滴加正常山羊血清封闭液,室温20 min。甩去多余液体,滴加Ⅰ抗(鼠抗人syndecan-1单克隆抗体,1:400稀释),室温1 h或者4℃过夜或者37℃1 h;⑤甩去1抗,滴加生物素化二抗((SuPerPic Ture聚合物),20℃~37℃20 min;⑥PBS冲洗三次,3 min/次;⑦DAB显色,苏木素复染,PBs冲洗返蓝,脱水、透明、封片、镜检。上述试剂均购至上海翔升生物科技有限公司。
1.3 染色結果判断 对全片进行整体评价,选取染色较为集中的区域进行细胞记数和结果判定,观察10个高倍镜视野,根据每高倍镜视野的阳性染色细胞数分为四组:0,阴性;1,<33%;2,33%~66%;3,>66%。
1.4 统计学分析 所有计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,运用SPSS17.0软件进行数据处理,两样本秩和检验采用Mann-Whitney U检验,多个样本秩和检验采用Kruskal-Wallis法,Fisher’s确切概率法比较分类资料的差异性,P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组一般资料比较 所有患者年龄21~71岁,中位数年龄44岁,其中NE组:平均年龄(42.5±5.1)岁,体质量(59.3±10.5)Kg,1例糖尿病;SH组:平均年龄(44.9±7.7)岁,体质量(60.8±1.2)Kg,2例糖尿病;CH组:平均年龄(40.0±7.6)岁,体质量(64.1±13.8)Kg,1例糖尿病;AH组:平均年龄(41.1±7.1)岁,体质量(65.0±10.2)Kg,2例糖尿病;EC组:平均年龄(47.2±11.7)岁,体质量(64.1±15.3)Kg,1例糖尿病。各组在年龄、体重、糖尿病构成比方面无统计学意义(P>0.05)。
2.2 Syndecan-1在正常子宫内膜、子宫内膜增生症、子宫内膜癌组织中的表达。
NE、SH、CH、AH、EC中Syndecan-1表达的平均分值分別是0.50,0.53,1.27,1.67,1.88,见图1。不同子宫内膜组织中Syndecan-1表达的频数见表1。从表1可以看出,各组Sydecan-1表达有差别(P<0.005),Syndecan-1在CH和AH中的表达显著高于SH(P<0.001),CH、AH、EC中Syndecan-1的表达明显强于NE(P=0.041,P=0.006,P=0.02),而NE中Syndecan-1的表达与SH的比较无差异(P>0.50)。
图1 不同子宫内膜组织中Syndecan-1表达的平均分值
3 讨论
syndecan-1(CD138)属于粘附分子整合素跨膜蛋白聚糖(proteoglyeans,pG)家族成员,多表达于成熟上皮细胞、前B细胞及浆细胞表面,是细胞间质、细胞质膜的重要组成部分,通过其分子表面的硫酸肝素侧链共价结合一系列细胞外配体如细胞粘附分子、基质成分、生长因子、酶和酶抑制物等,以共受体(as cell-surface co-receptors)方式调节细胞与微环境之间的相互关系及细胞行为,参与组织器官分化发育、血管形成、组织再生等一系列生理过程的调节。大量研究证实,当正常细胞恶变后,细胞膜表面Syndecan-1分子的表达异常,与肿瘤的恶性程度、预后相关,并且肿瘤类型不同,其临床意义亦不同,Syndecan-1表达增高与食道癌[2]、喉癌[3]、肝癌[4]、肺癌[5]、结肠癌[6]的组织高分化、异型性小、临床低分期和预后良好有关,与上述肿瘤类型相反,前列腺癌[7]、乳腺癌[8]、甲状腺癌[9]Syndecan-1表达增高提示肿瘤预后不良,说明不同类型肿瘤对Syndecan-1表达水平的改变所表现出的不同反应,提示Syndecan-1功能可能具有组织特异性。
Syndecan-1与子宫内膜癌的关系很少被提及,其在子宫内膜癌的作用及机制尚未明了,因此,本研究主要是针对子宫内膜增生的一系列形态变化,对Syndecan-1表达的临床意义进行评价,因为子宫内膜增生症发展为子宫内膜癌的风险率与细胞的不典型程度有关,Kurman[10]等研究发现,SH约有1%可发展为EC,CH大约3%发展为EC,AH约有29%发展为EC,本组数据发现,根据上述不同子宫内膜组织类型,其Syndecan-1亦有显著性差异,从表1可以看出,各组Sydecan-1表达有差别(P<0.005),Syndecan-1在CH和AH中的表达显著高于SH(P<0.001),CH、AH、EC中Syndecan-1的表达明显强于NE(P=0.041,P=0.006,P=0.02),EC中Syndecan表达明显高于CH(P=0.04),而NE中Syndecan-1的表达与SH的比较无差异(P>0.50)。提示Syndecan-1可作为子宫内膜增生症发展为子宫内膜癌的预警指标。
本研究尚未对Syndecan-1表达与子宫内膜癌的预后及其临床病理分期的关系作出分析,此方面研究尚需进一步扩大样本例数,有待进一步研究。总之,Syndeean-1的表达水平与子宫内膜增生紧密相关,能在一定程度上反映子宫内膜增生的发生发展。
参考文献
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[4] Harada K,Masuda S,Hirano M,et al.Reduced expression of syndecan-1correlates with histologic dedifferentiation,lymphnode metastasis,and poor prognosis in intrahepatic cholangio-carcinoma.Hum Pathol,2003,34(9):857-863.
[5] Anttonen A,Heikkila P,Kajanti M,Jalkanen M,Joensuu H.High syndecan-1 expression is associated with favourable outcome in squamous cell lung carcinoma treated with radical surgery.Lung Cancer,2001,32:297-305.
[6] Fujiya M,Watari J,Ashida T,Honda M,Tanabe H,Fujiki T,et al.Reduced expression of syndecan-1 affects metastatic potential and clinical outcome in patients with colorectal cancer.Jpn J Cancer Res,2001,92:1074-1081.
[7] Shariat S F,Svatek R S,Kabbani W,et al.Prognostic value of syndecan-1 expression in patients treated with radical prostatectomy.BJU Int,2008,101(2):232-237.
[8] Su G,Blaine S A,Qiao D,et al.Shedding of syndecan-1 by stromal fibroblasts stimulates human breast cancer cell prolif-eration via FGF-2activation.J Biol Chem,2007,282(20):14906-14915.
[9] Ito Y,Yoshida H,Nakano K,Takamura Y,Miya A,Kobayashi K,et al.Syndecan-1 expression in thyroid carcinoma:stromal expression followed by epithelial expression is significantly correlated with dedifferentiation.Histopathology,2003,43:157-164.
[10] Kurman RJ,Kaminski PF,Norris HJ.The behavior of endometrial hyperplasia:a long-term study of "untreated" hyperplasia in 170 patients.Cancer,1985,56:403-412.