【摘 要】
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目的 探讨胰岛素刺激血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）ACTA2rs1324551（A/G）位点突变对细胞表型转化、增殖及迁移的影响。方法 分离大鼠原代VSMCs，构建ACTA2 rs1324551（A/G）位点突变慢病毒转染VSMCs；将VSMCs细胞分组为常规培养组与胰岛素（10-7mol/L）培养组，采用CCK-8试剂盒检测胰岛素刺激后细胞
【机 构】
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重庆医科大学附属璧山区人民医院心血管内科
【基金项目】
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重庆市自然科学基金项目（项目编号：cstc2019jcyj-msxmX0802）；
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目的 探讨胰岛素刺激血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）ACTA2rs1324551（A/G）位点突变对细胞表型转化、增殖及迁移的影响。方法 分离大鼠原代VSMCs，构建ACTA2 rs1324551（A/G）位点突变慢病毒转染VSMCs；将VSMCs细胞分组为常规培养组与胰岛素（10-7mol/L）培养组，采用CCK-8试剂盒检测胰岛素刺激后细胞增殖水平，采用细胞划痕实验、Transwell实验检测胰岛素刺激后细胞迁移水平；利用生物信息学对rs1324551序列进行分析，通过荧光素酶报告基因实验检测激活蛋白-1（activating protein-1,AP-1）调控ACTA2rs1324551（A/G）位点表达情况；检测胰岛素刺激后VSMCs的MAPK/ERK/AP-1信号通路及SM-α的蛋白表达水平。结果 胰岛素刺激后突变型VSMCs细胞的增殖水平较野生型VSMCs细胞显著增高（P＜0.05）；细胞划痕实验、Transwell实验发现胰岛素刺激后突变型VSMCs细胞的迁移水平较野生型VSMCs细胞显著增加（P＜0.05）；荧光素酶报告基因显示AP-1可与ACTA2 rs1324551（GG）位点结合并抑制ACTA2基因表达，同时胰岛素刺激后MAPK/ERK/AP-1通路激活，SM-α蛋白表达下调。结论 胰岛素可能通过MAPK/ERK/AP-1信号通路抑制VSMCs ACTA2基因rs1324551（GG）位点的表达，从而调控VSMCs的表型转化、增殖及迁移等生物学过程。rs1324551（GG）可能是影响SM-α蛋白表达的一个新顺式调控位点，并可能在II型糖尿病合并动脉粥样硬化患者的疾病进展中发挥关键作用。
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