【摘 要】
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目的 探讨微小RNA(miR)-153-3p对肺癌A549细胞免疫抑制因子表达的影响及其作用机制.方法 培养人肺癌A549细胞和正常肺上皮BEAS-2B细胞,将肺癌A549细胞分为对照组(未做任何处理)、NC组(转染NC-mimics)和mimics组(转染miR-153-3p mimics).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-153-3p和吲哚胺2,3双加氧酶(IDO1)mRNA表达;蛋白质印迹法检测细胞中IDO1、转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)和白介
【机 构】
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武汉市第一医院呼吸内科,湖北 武汉 430000
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目的 探讨微小RNA(miR)-153-3p对肺癌A549细胞免疫抑制因子表达的影响及其作用机制.方法 培养人肺癌A549细胞和正常肺上皮BEAS-2B细胞,将肺癌A549细胞分为对照组(未做任何处理)、NC组(转染NC-mimics)和mimics组(转染miR-153-3p mimics).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-153-3p和吲哚胺2,3双加氧酶(IDO1)mRNA表达;蛋白质印迹法检测细胞中IDO1、转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)和白介素-6(IL-6)蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺癌细胞培养液中TGF-β、VEGF和IL-6水平;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;双荧光素酶报告基因验证IDO1与miR-153-3p靶向调控关系.在mimics组中添加IDO1后检测细胞VEGF、TGF-β和IL-6蛋白表达情况.结果 与BEAS-2B细胞相比,肺癌A549细胞中miR-153-3p相对表达量降低(t=10.269,P<0.001),IDO1 mRNA相对表达量(t=5.124,P<0.001)和蛋白表达量(t=9.579,P<0.001)均升高.与对照组和NC组比较,mimics组细胞中miR-153-3p相对表达量(q=21.811,P<0.001;q=22.732,P<0.001)升高;IDO1 mRNA相对表达量(q=12.847,P<0.001;q=13.098,P<0.001)和蛋白相对表达量(q=11.262,P<0.001;q=8.078,P<0.001)降低.12、24和48 h时,mimics组细胞增殖率低于对照组(q=10.046,q=12.894,q=19.726,均P<0.001)和NC组(q=10.809,q=12.041,q=18.989,均P<0.001);与对照组和NC组比较,细胞培养液中VEGF(q=13.385,P<0.001;q=13.113,P<0.001)、TGF-β(q=11.672,P<0.001;q=10.251,P<0.001)和IL-6(q=17.203,P<0.001;q=15.113,P<0.001)表达水平降低;VEGF(q=9.174,P<0.001;q=12.182,P<0.001)、TGF-β(q=10.026,P<0.001;q=10.530,P<0.001)和IL-6蛋白(q=10.954,P<0.001;q=15.187,P<0.001)表达降低.与IDO1-3′-UTR组比较,miR-153-3p+IDO1-3′-UTR组报告载体荧光素酶活性降低(q=6.528,P<0.001).与mimics组相比,mimics+pc-IDO1组细胞中VEGF(t=8.660,P<0.001)、TGF-β(t=9.308,P<0.001)和IL-6(t=11.758,P<0.001)蛋白表达水平升高.结论 miR-153-3p在肺癌细胞中呈低表达,且过表达miR-153-3p可能通过靶向抑制肺癌细胞中IDO1表达来抑制免疫抑制因子分泌及肿瘤细胞免疫逃逸.
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