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目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率在环球内呈上升的趋向,其发生和转移是一个与多因素相关的复杂过程。经研究发现,STIM1蛋白是构成钙库操纵性钙通道(store-opetated Ca2+channels,SOCs)的主要成分之一,是细胞内钙离子的传感器,可以使细胞外的钙离子进入细胞内,从而参与乳腺癌的侵袭和转移过程。micro RNA是一类由内源基因编码的非编码单链RNA分子,参与生命活动中的重要进程,约调控人类三分之一的基因。有些miRNAs可以通过转录后负性调控致癌性靶基因表达的方式而发挥抑癌功能;相反,有一部分miRNAs可以通过下调抑癌靶基因表达的方式起到癌基因的作用。在前期工作中,我们小组利用免疫组化的方法发现STIM1蛋白在乳腺IDC组织中呈高表达状态,且STIM1高表达是乳腺癌患者预后的一个不良指标。经生物信息学预测miR-223-3p和miR-150-5p有可能直接调控STIM1基因,从而在乳腺癌的疾病进程中发挥作用。目前在乳腺IDC中miR-223-3p和miR-150-5p与STIM1基因的关系及作用机制尚不清楚,因此本课题旨在研究miR-223-3p-STIM1及miR-150-5p-STIM1在乳腺癌中的相互作用以及两个miRNA和STIM1蛋白与乳腺癌临床病理资料和预后的关系,为乳腺癌病人提供新的预后标志物,并且为乳腺癌的综合治疗需找新的靶点。方法本题选取天津市肿瘤医院2007年1月至2009年12月期间的原发性乳腺IDC患者110例以及其中癌和对应癌旁组织的标本60例,通过查阅病历的方式获取患者的临床病理资料,通过电话随访或者门诊电子检查结果获取随访信息。通过构建双荧光素酶报告基因的方法验证STIM1是miR-223-3p和miR-150-5p直接调控的靶基因,此实验重复三次。采用乳腺癌组织切片原位杂交的方法检测miR-223-3p和miR-150-5p在乳腺癌组织及相应的癌旁组织中的表达量,用Kaplan-Meier法分析miR-223-3p、miR-150-5p和STIM1蛋白与乳腺癌患者总生存时间和无病生存时间的相关性,用卡方检验分析miR-223-3p、miR-150-5p和STIM1蛋白与患者临床病理资料的关系。根据前期中我们用免疫组化方法测定的乳腺癌组织中的STIM1蛋白的表达结果,用Spearman相关法分析miR-223-3p和miR-150-5p分别与STIM1蛋白的相关性,P<0.05具有统计学差异。结果1.结果显示,在miR-223-3p组中,在MDA-MB-231和MCF-7两个乳腺癌细胞系中转染STIM1-3,UTR-WT后荧光素酶的相对荧光值明显下降,而转染STIM1-3,UTR-MT后荧光素酶的相对荧光值没有明显变化(P<0.05)。说明miR-223-3p可以直接与STIM1-3,UTR区结合,从而影响其生物学功能。在MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞系中转染STIM1-3‘UTR-WT/miR-150-5p mimic与STIM1-3,UTR-MT/miR-150-5p mimic的相对荧光值差异并没有统计学意义,P值分别为0.754和0.458。2.miR-223-3p在乳腺癌组织中表达较低,高表达水平的乳腺癌患者的预后优于低表达水平的患者(OS:P=0.038;DFS:P=0.196)。在乳腺癌组织中miR-223-3p表达水平与STIM1蛋白的表达水平呈负相关(r=-1.914,P=0.043)。miR-223-3p的表达水平与患者的淋巴结转移(P=0.035)呈显著相关性。3.miR-150-5p在乳腺癌组织中呈高表达,表达较低的乳腺癌患者的预后有优于表达高的患者的趋势,(OS:P=0.734;DFS:P=0.077)。在乳腺癌组织中miR-150-5p表达水平与STIM1蛋白的表达水平不具有显著的相关性(r=0.001,P=0.991)。miR-150-5p表达水平与乳腺肿瘤大小(P=0.035)、TNM病理分期(P=0.003)以及ER状态(P=0.035)具有显著的关联性。结论1.miR-223-3p在乳腺浸润性导管在组织中表达水平较低,低表达的乳腺癌患者更容易出现淋巴结转移,miR-223-3p高表达组的患者较低表达的患者预后好,STIM1是miR-223-3p直接调控的靶基因,有可能成为治疗乳腺癌的新药物。2.在乳腺浸润性导管癌组织中,miR-150-5p表达较高,miR-150-5p低表达的乳腺癌患者有优于高表达的趋势。miR-150-5p表达水平与患者肿瘤大小和乳腺癌TNM分期以及ER相关,提示miR-150-5p在乳腺癌的侵袭和转移中起到重要作用。