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[摘 要]目的 建立快速测定齐墩果酸片含量的方法。方法 采用毛细管电泳法，未涂层弹性石英毛细管（75 μm×50 cm，有效长度40 cm）；压力进样，压力：3.0 kPa；进样时间：5 s；分离电压：25 kV；柱温：25 ℃；检测波长：200 nm；运行缓冲液：含5%（体积分数）甲醇的20 mmol·L-1硼砂溶液（pH 9.4）；运行时间：10 min。结果 齐墩果酸的线性范围为 2.58～660 μg·mL-1（r=0.999 7），平均回收率为99.47%，RSD为1.28% （n=6）。结论 方法准确、快速、简便，适于齐墩果酸片的含量测定。
[关键词]齐墩果酸片 毛细管电泳 含量测定
中图分类号：R186+.4文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）17-0231-01
齐墩果酸片具有护肝降酶、抗炎、强心利尿、抗肿瘤等作用，临床上除广泛应用于急、慢性肝炎的辅助治疗外，也用于配合肿瘤病人的手术、放疗、化疗，促进免疫功能恢复以及再生障碍性贫血、红斑狼疮等免疫缺陷性疾病。目前国内有许多厂家生产齐墩果酸片，生产上采用酸碱非水滴定法测定其含量，但该方法终点不易掌握，专属性差，误差较大。也有采用比色法、薄层扫描法、HPLC法等测定齐墩果酸片的含量，但以上方法均存在费时长、样品用量多、操作繁琐等问题。而毛细管电泳法具有高效、快速、准确、操作简便、样品用量少等优点，适合快速分析样品。笔者采用毛细管电泳测定齐墩果酸片中有效成分的含量，结果方法快速、灵敏、简便、结果准确。
1 仪器与试药
俄罗斯Lumex CAPEL105型毛细管电泳仪，紫外检测器，弹性石英毛细管（直径75 μm，总长50 cm，有效长度40 cm，河北永年光导纤维厂）。
齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：1107 09200304）；齐墩果酸片（山西亨瑞达制药有限公司，批号：060102、060106、060507、060906，规格为20 mg·片-1）；硼砂（Na2B4O7·H2O）、硼酸、乙醇、甲醇、乙腈均为分析纯，实验用水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 分离条件
进样方式，压力进样，压力3.0 kPa，进样5 s；分离电压为25 kV（恒压分析）；柱温25 ℃；紫外检测波长200 nm；以含5%（体积分数）甲醇的20 mmol·L-1 硼砂溶液（pH 9.4）为运行缓冲液。实验前，毛细管依次用0.1 mol·L-1盐酸、重蒸水、0.1 mol·L-1NaOH溶液、重蒸水各冲洗5 min，然后用运行缓冲液冲洗3 min。在每2次运行之间，毛细管用0.1 mol·L-1NaOH溶液冲洗2 min，重蒸水和运行缓冲液各冲洗3 min。试验前运行缓冲液用0.22 μm滤膜过滤和超声波脱气。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品储备液的制备 精密称取齐墩果酸对照品6.6 mg于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，以0.22 μm滤膜过滤，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取供试品20片精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于齐墩果酸20 mg）置100 mL量瓶中，加甲醇约60 mL，超声30 min，放冷，加甲醇定容刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。实验前样品溶液经0.22 μm滤膜过滤，备用。
2.3 线性关系
精密量取不同体积“2.2.1”项下的齐墩果酸对照品储备液，分别加甲醇制得质量浓度为2.58、10.3、41.2、82.5、165、330、660 μg·mL-1的一系列对照品溶液，进样测定，以峰面积积分值（A）为纵坐标，质量浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得線性回归方程为：A=0.3523ρ+0.275，r=0.999 7。表明齐墩果酸在2.58～660 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。
2.4 精密度试验
取质量浓度330 μg·mL-1齐墩果酸对照品溶液连续进样6次，结果峰面积积分值的RSD为0.58%，表明精密度良好。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、4、8、24、72 h进样，记录色谱图，结果峰面积积分值的RSD为0.79%，表明样品溶液在72 h内稳定。
2.6 重复性试验
取同一批号（060106）样品，照“2.2.2”项下的方法制备6份供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，结果齐墩果酸平均含量为标示量的97.8%，RSD为0. 57%，表明方法重复性良好。
2.7 加样回收率试验
精密称取6份已知含量的供试品细粉适量（相当于齐墩果酸10 mg），加入齐墩果酸对照品约9.5 mg，按“2.2.2”项下的方法制备溶液，进样测定，计算回收率，结果齐墩果酸的平均加样回收率为99.47% （n=6），RSD为1.28%。
2.8 最低检出限和定量限
当信噪比为3时，最低检出限为0.13 μg·mL-1；当信噪比为10时，定量限为0.52 μg·mL-1。
2.9 样品测定
取3个不同批号（060102、060507、060906）的齐墩果酸片，按“2.2.2”项下方法制备溶液，依上述色谱条件进样测定，3批样品的测定结果分别为标示量的97.0%、99.4%、96.8%（n=3）。
3 讨论
3.1 比较了磷酸盐、磷酸盐硼砂、硼砂硼酸等多种缓冲体系及其浓度对分离效果的影响。结果发现，20 mmol·L-1的硼砂缓冲溶液体系，电泳电流较小，基线平稳，齐墩果酸出峰快（4.10 min），信号灵敏度高。故选择20 mmol·L-1的硼砂（pH 9.4）作为背景电解质溶液比较理想。
3.2 为改善峰形和提高检测灵敏度，实验添加了适量的有机溶剂。比较了添加不同有机溶剂种类（甲醇、乙醇、乙腈）及体积比例对分离检测的影响。结果表明选用体积分数为5.0%甲醇作为添加剂可有效提高分离度和灵敏度。
3.3 齐墩果酸片收载于《卫生部药品标准》二部第三册，含量测定采用酸碱滴定法，用乙醇制氢氧化钾滴定液，其配制较繁琐，测定终点不明显；采用HPLCUV检测时，由于齐墩果酸为五环三萜类成分，在200 nm处有末端吸收，测定结果受流动相影响大，基线不理想，检测灵敏度较低；毛细管电泳具有快速、准确、操作简便、样品用量少等优势，本实验中，样品的测定在5 min内就能完成，且能克服HPLC法紫外末端检测的不足。
3.4 本实验同时采用卫生部药品标准收载的酸碱滴定法和HPLCUV法测定3批样品中的齐墩果酸含量，测得的结果分别为100.6%、102.0%、99.3%和96.9%、99.9%、96.2%。说明酸碱滴定法测定的结果偏高，毛细管电泳法测定的结果与HPLC法测定的结果接近，表明本方法的准确性可靠。
参考文献
[1] 罗朝晖.高效液相色谱法测定三叶香茶菜中齐墩果酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18（2）：417-418.
[2] 张锋，朱培仪，宋粉云.毛细管电泳高频电导法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量[J].广东药学院学报，2008，24（2）：108-109.
[关键词]齐墩果酸片 毛细管电泳 含量测定
中图分类号：R186+.4文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）17-0231-01
齐墩果酸片具有护肝降酶、抗炎、强心利尿、抗肿瘤等作用，临床上除广泛应用于急、慢性肝炎的辅助治疗外，也用于配合肿瘤病人的手术、放疗、化疗，促进免疫功能恢复以及再生障碍性贫血、红斑狼疮等免疫缺陷性疾病。目前国内有许多厂家生产齐墩果酸片，生产上采用酸碱非水滴定法测定其含量，但该方法终点不易掌握，专属性差，误差较大。也有采用比色法、薄层扫描法、HPLC法等测定齐墩果酸片的含量，但以上方法均存在费时长、样品用量多、操作繁琐等问题。而毛细管电泳法具有高效、快速、准确、操作简便、样品用量少等优点，适合快速分析样品。笔者采用毛细管电泳测定齐墩果酸片中有效成分的含量，结果方法快速、灵敏、简便、结果准确。
1 仪器与试药
俄罗斯Lumex CAPEL105型毛细管电泳仪，紫外检测器，弹性石英毛细管（直径75 μm，总长50 cm，有效长度40 cm，河北永年光导纤维厂）。
齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：1107 09200304）；齐墩果酸片（山西亨瑞达制药有限公司，批号：060102、060106、060507、060906，规格为20 mg·片-1）；硼砂（Na2B4O7·H2O）、硼酸、乙醇、甲醇、乙腈均为分析纯，实验用水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 分离条件
进样方式，压力进样，压力3.0 kPa，进样5 s；分离电压为25 kV（恒压分析）；柱温25 ℃；紫外检测波长200 nm；以含5%（体积分数）甲醇的20 mmol·L-1 硼砂溶液（pH 9.4）为运行缓冲液。实验前，毛细管依次用0.1 mol·L-1盐酸、重蒸水、0.1 mol·L-1NaOH溶液、重蒸水各冲洗5 min，然后用运行缓冲液冲洗3 min。在每2次运行之间，毛细管用0.1 mol·L-1NaOH溶液冲洗2 min，重蒸水和运行缓冲液各冲洗3 min。试验前运行缓冲液用0.22 μm滤膜过滤和超声波脱气。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品储备液的制备 精密称取齐墩果酸对照品6.6 mg于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，以0.22 μm滤膜过滤，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取供试品20片精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于齐墩果酸20 mg）置100 mL量瓶中，加甲醇约60 mL，超声30 min，放冷，加甲醇定容刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。实验前样品溶液经0.22 μm滤膜过滤，备用。
2.3 线性关系
精密量取不同体积“2.2.1”项下的齐墩果酸对照品储备液，分别加甲醇制得质量浓度为2.58、10.3、41.2、82.5、165、330、660 μg·mL-1的一系列对照品溶液，进样测定，以峰面积积分值（A）为纵坐标，质量浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得線性回归方程为：A=0.3523ρ+0.275，r=0.999 7。表明齐墩果酸在2.58～660 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。
2.4 精密度试验
取质量浓度330 μg·mL-1齐墩果酸对照品溶液连续进样6次，结果峰面积积分值的RSD为0.58%，表明精密度良好。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、4、8、24、72 h进样，记录色谱图，结果峰面积积分值的RSD为0.79%，表明样品溶液在72 h内稳定。
2.6 重复性试验
取同一批号（060106）样品，照“2.2.2”项下的方法制备6份供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，结果齐墩果酸平均含量为标示量的97.8%，RSD为0. 57%，表明方法重复性良好。
2.7 加样回收率试验
精密称取6份已知含量的供试品细粉适量（相当于齐墩果酸10 mg），加入齐墩果酸对照品约9.5 mg，按“2.2.2”项下的方法制备溶液，进样测定，计算回收率，结果齐墩果酸的平均加样回收率为99.47% （n=6），RSD为1.28%。
2.8 最低检出限和定量限
当信噪比为3时，最低检出限为0.13 μg·mL-1；当信噪比为10时，定量限为0.52 μg·mL-1。
2.9 样品测定
取3个不同批号（060102、060507、060906）的齐墩果酸片，按“2.2.2”项下方法制备溶液，依上述色谱条件进样测定，3批样品的测定结果分别为标示量的97.0%、99.4%、96.8%（n=3）。
3 讨论
3.1 比较了磷酸盐、磷酸盐硼砂、硼砂硼酸等多种缓冲体系及其浓度对分离效果的影响。结果发现，20 mmol·L-1的硼砂缓冲溶液体系，电泳电流较小，基线平稳，齐墩果酸出峰快（4.10 min），信号灵敏度高。故选择20 mmol·L-1的硼砂（pH 9.4）作为背景电解质溶液比较理想。
3.2 为改善峰形和提高检测灵敏度，实验添加了适量的有机溶剂。比较了添加不同有机溶剂种类（甲醇、乙醇、乙腈）及体积比例对分离检测的影响。结果表明选用体积分数为5.0%甲醇作为添加剂可有效提高分离度和灵敏度。
3.3 齐墩果酸片收载于《卫生部药品标准》二部第三册，含量测定采用酸碱滴定法，用乙醇制氢氧化钾滴定液，其配制较繁琐，测定终点不明显；采用HPLCUV检测时，由于齐墩果酸为五环三萜类成分，在200 nm处有末端吸收，测定结果受流动相影响大，基线不理想，检测灵敏度较低；毛细管电泳具有快速、准确、操作简便、样品用量少等优势，本实验中，样品的测定在5 min内就能完成，且能克服HPLC法紫外末端检测的不足。
3.4 本实验同时采用卫生部药品标准收载的酸碱滴定法和HPLCUV法测定3批样品中的齐墩果酸含量，测得的结果分别为100.6%、102.0%、99.3%和96.9%、99.9%、96.2%。说明酸碱滴定法测定的结果偏高，毛细管电泳法测定的结果与HPLC法测定的结果接近，表明本方法的准确性可靠。
参考文献
[1] 罗朝晖.高效液相色谱法测定三叶香茶菜中齐墩果酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18（2）：417-418.
[2] 张锋，朱培仪，宋粉云.毛细管电泳高频电导法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量[J].广东药学院学报，2008，24（2）：108-109.