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[摘 要]目的 优选丹参有效成分最佳提取工艺。方法 通过多种提取工艺（传统水煎法、乙醇回流法、超声波法、超临界萃取法）的比较，以丹参素和丹参酮ⅡA为指标成分，优化最佳提取工艺。结果 CO2超临界流体萃取法提取具有较高的丹参素和丹参酮ⅡA有效成分含量。结论 CO2超临界流体萃取法可以用于丹参有效成分的提取，为丹参制剂的前处理提供实验依据。
[关键词]丹参 加工 工艺
中图分类号：R282.4文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）17-0233-01
丹参为唇形科植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除躁之功效。复方丹参制剂是我国治疗冠心病、心绞痛的常用中成药，由丹参、三七及冰片组成。现代药理学研究表明，丹参能够增加冠状动脉血流量、降血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循环。特别是在近20年里，丹参治疗冠心病的研究报道甚多。丹参主要有效成分为水溶性酚性酸类（丹参素和原儿茶醛）、脂溶性二萜醌类（丹参酮ⅡA）。本实验以丹参素和丹参酮ⅡA为指标成分，通过多种方法研究丹参的提取工艺，并采用高效液相色谱法对指标成分进行含量测定，确定出最佳提取工艺，为丹参制剂的前处理提供实验依据。
一、仪器和试剂
Waters高效液相色谱仪（美国Waters公司），KQ-500DE型医用超声波（昆山市超声仪器有限公司，频率40 kHz）。丹参购于广州清平药材市场，经鉴定为正品；丹参素对照品（自制，批号20040510，含量99.5%）、丹参酮ⅡA对照品（自制，批号20041015，含量99.2%）。甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
二、分析检测方法
1、丹参素HPLC分析的色谱条件
色谱柱：Zorbax ODS反相柱（250 mm×4.6mm，5 μm），流动相：甲醇-水=0.1∶0.9（用冰醋酸调pH=3），进样量：20 μL；灵敏度：0.16；柱温：40 ℃；λ=281 nm；流速：1.0 mL/min。
2、丹参酮ⅡA HPLC分析的色谱条件
色谱柱：Zorbax ODS反相柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流
动相：甲醇-水=0.85∶0.15，进样量：20 μL；灵敏度：0.32；柱温：40 ℃；λ=270 nm；流速：1.0 mL/min。
三、实验方法
1、传统水煎法
1）试验方法
准确称取丹参25.00 g，加入一定量的水，加热煎煮，根据试验。丹参提取液水浴浓缩，用蒸馏水洗入50 mL量瓶，定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量，计算提取量。
2）结果分析
由实验结果得出，影响因素顺序为B>C>A，最佳工艺为A3B3C2，即采用12倍量水，煎煮2次，每次1.5 h的煎煮方法，其丹参素和丹参酮ⅡA含量明显高于其他条件的含量。故认为此条件为传统水煎法的最佳提取条件。
2、乙醇回流法
1）试验方法
准确称取丹参25.00 g，加入一定浓度、一定量的乙醇，加热回流，根据试验。丹参提取液高速离心，上清液回收乙醇，再水浴浓缩，用蒸馏水洗入50 mL量瓶，定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA的含量，计算提取量。
2）结果分析
丹参素的提取量：根据实验结果得出，其影响因素顺序为C>B>A，最佳工艺为A2B2C3，即60%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析得知影响提取效果的主要因素是回流时间，乙醇浓度和乙醇量对其影响不显著。
丹参酮ⅡA的提取量：根据实验结果判断其影响因素顺序为A>C>B，最佳工艺为A3B2C3，即80%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析可知，乙醇浓度对提取效果有显著性差异，乙醇量和回流时间对其影响不显著。
综合考虑认为丹参采用回流提取法，以80 %乙醇、10倍量回流2次、每次1. 5 h的方法较好。
3、超声波提取法
1）试验方法
准确称取丹参25.00 g，加入一定量的水，超声提取，根据试验。丹参提取液水浴浓缩，用蒸馏水洗入50 mL量瓶，定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量，计算提取量。
2）结果分析
由实验结果得知：影响因素顺序为B>A>C，最佳工艺为A1B2C2，即40 Hz、12倍加水量、60 min，其丹参素和丹参酮ⅡA的含量高于其他条件的含量。
4、CO2超临界流体萃取法
1）试验方法
准确称取丹参25.00 g，选用不同萃取压力、萃取温度、原料粒度（目数）、95%的乙醇做夹带剂，根据试验。丹参提取液水浴浓缩，用蒸馏水洗入50 mL量瓶，定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量，计算提取量。
2）结果分析
由实验结果得知：影响萃取率工艺参数顺序：D>C>A>B，最优化工艺条件为：A3B2C3D3，即萃取压力25 MPa，萃取温度45 ℃，夹带剂用量（95%的乙醇）400 mL/h，原料粒度为40目，其丹参素和丹参酮ⅡA的含量高于其他条件的含量。
四、结论与分析
从丹参不同提取工艺结果比较可以看出，采用CO2超临界流体萃取法所提取丹参素及丹参酮ⅡA的含量均高于其他提取方法，而且该方法具有无毒、快速、价廉、低温操作，产品稳定性好、符合环保要求等优点，为其工业化生产提供了重要依据。
丹参的主要成分有水溶性丹参素和脂溶性的丹参酮ⅡA。丹参素溶于水，且热稳定性較好，故水煎法与乙醇回流法的丹参素较高，CO2超临界流体萃取法最高；脂溶性的丹参酮ⅡA受热不稳定，会分解，受加热和浓缩时间的影响，故用水做溶媒的提取含量偏低，用乙醇作为夹带剂的CO2超临界流体萃取法含量最高。故选用CO2超临界流体萃取法来提取丹参的有效成分。
参考文献
[1] 李向军，刘敏彦，赵兴茹，等.丹参水溶性成分提取工艺研究[J].中国中医药信息杂志，2005，12（12）：49.
[2] 陈彦，贾晓斌.不同提取法测定丹参药材中丹参素含量的比较研究[J].江苏中医药，2003，24（6）：55.
[3] 邹节明，梁芳琳，吴广雄.CO2超临界流体技术应用于中药有效成分萃取的实验研究[J].中国中药杂志，2003，28（5）：413.
[关键词]丹参 加工 工艺
中图分类号：R282.4文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）17-0233-01
丹参为唇形科植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除躁之功效。复方丹参制剂是我国治疗冠心病、心绞痛的常用中成药，由丹参、三七及冰片组成。现代药理学研究表明，丹参能够增加冠状动脉血流量、降血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循环。特别是在近20年里，丹参治疗冠心病的研究报道甚多。丹参主要有效成分为水溶性酚性酸类（丹参素和原儿茶醛）、脂溶性二萜醌类（丹参酮ⅡA）。本实验以丹参素和丹参酮ⅡA为指标成分，通过多种方法研究丹参的提取工艺，并采用高效液相色谱法对指标成分进行含量测定，确定出最佳提取工艺，为丹参制剂的前处理提供实验依据。
一、仪器和试剂
Waters高效液相色谱仪（美国Waters公司），KQ-500DE型医用超声波（昆山市超声仪器有限公司，频率40 kHz）。丹参购于广州清平药材市场，经鉴定为正品；丹参素对照品（自制，批号20040510，含量99.5%）、丹参酮ⅡA对照品（自制，批号20041015，含量99.2%）。甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
二、分析检测方法
1、丹参素HPLC分析的色谱条件
色谱柱：Zorbax ODS反相柱（250 mm×4.6mm，5 μm），流动相：甲醇-水=0.1∶0.9（用冰醋酸调pH=3），进样量：20 μL；灵敏度：0.16；柱温：40 ℃；λ=281 nm；流速：1.0 mL/min。
2、丹参酮ⅡA HPLC分析的色谱条件
色谱柱：Zorbax ODS反相柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流
动相：甲醇-水=0.85∶0.15，进样量：20 μL；灵敏度：0.32；柱温：40 ℃；λ=270 nm；流速：1.0 mL/min。
三、实验方法
1、传统水煎法
1）试验方法
准确称取丹参25.00 g，加入一定量的水，加热煎煮，根据试验。丹参提取液水浴浓缩，用蒸馏水洗入50 mL量瓶，定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量，计算提取量。
2）结果分析
由实验结果得出，影响因素顺序为B>C>A，最佳工艺为A3B3C2，即采用12倍量水，煎煮2次，每次1.5 h的煎煮方法，其丹参素和丹参酮ⅡA含量明显高于其他条件的含量。故认为此条件为传统水煎法的最佳提取条件。
2、乙醇回流法
1）试验方法
准确称取丹参25.00 g，加入一定浓度、一定量的乙醇，加热回流，根据试验。丹参提取液高速离心，上清液回收乙醇，再水浴浓缩，用蒸馏水洗入50 mL量瓶，定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA的含量，计算提取量。
2）结果分析
丹参素的提取量：根据实验结果得出，其影响因素顺序为C>B>A，最佳工艺为A2B2C3，即60%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析得知影响提取效果的主要因素是回流时间，乙醇浓度和乙醇量对其影响不显著。
丹参酮ⅡA的提取量：根据实验结果判断其影响因素顺序为A>C>B，最佳工艺为A3B2C3，即80%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析可知，乙醇浓度对提取效果有显著性差异，乙醇量和回流时间对其影响不显著。
综合考虑认为丹参采用回流提取法，以80 %乙醇、10倍量回流2次、每次1. 5 h的方法较好。
3、超声波提取法
1）试验方法
准确称取丹参25.00 g，加入一定量的水，超声提取，根据试验。丹参提取液水浴浓缩，用蒸馏水洗入50 mL量瓶，定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量，计算提取量。
2）结果分析
由实验结果得知：影响因素顺序为B>A>C，最佳工艺为A1B2C2，即40 Hz、12倍加水量、60 min，其丹参素和丹参酮ⅡA的含量高于其他条件的含量。
4、CO2超临界流体萃取法
1）试验方法
准确称取丹参25.00 g，选用不同萃取压力、萃取温度、原料粒度（目数）、95%的乙醇做夹带剂，根据试验。丹参提取液水浴浓缩，用蒸馏水洗入50 mL量瓶，定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量，计算提取量。
2）结果分析
由实验结果得知：影响萃取率工艺参数顺序：D>C>A>B，最优化工艺条件为：A3B2C3D3，即萃取压力25 MPa，萃取温度45 ℃，夹带剂用量（95%的乙醇）400 mL/h，原料粒度为40目，其丹参素和丹参酮ⅡA的含量高于其他条件的含量。
四、结论与分析
从丹参不同提取工艺结果比较可以看出，采用CO2超临界流体萃取法所提取丹参素及丹参酮ⅡA的含量均高于其他提取方法，而且该方法具有无毒、快速、价廉、低温操作，产品稳定性好、符合环保要求等优点，为其工业化生产提供了重要依据。
丹参的主要成分有水溶性丹参素和脂溶性的丹参酮ⅡA。丹参素溶于水，且热稳定性較好，故水煎法与乙醇回流法的丹参素较高，CO2超临界流体萃取法最高；脂溶性的丹参酮ⅡA受热不稳定，会分解，受加热和浓缩时间的影响，故用水做溶媒的提取含量偏低，用乙醇作为夹带剂的CO2超临界流体萃取法含量最高。故选用CO2超临界流体萃取法来提取丹参的有效成分。
参考文献
[1] 李向军，刘敏彦，赵兴茹，等.丹参水溶性成分提取工艺研究[J].中国中医药信息杂志，2005，12（12）：49.
[2] 陈彦，贾晓斌.不同提取法测定丹参药材中丹参素含量的比较研究[J].江苏中医药，2003，24（6）：55.
[3] 邹节明，梁芳琳，吴广雄.CO2超临界流体技术应用于中药有效成分萃取的实验研究[J].中国中药杂志，2003，28（5）：413.