【摘 要】
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目的探讨miR-32通过靶向调控KLF4影响胶质瘤细胞增殖和侵袭的分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测miR-32在胶质细胞株(HA)和胶质瘤细胞株(U87、U373MG、U251)中的表达情况；进一步通过细胞增殖(MTT)、细胞侵袭及划痕实验判断miR-32对U87胶质瘤细胞株的影响。之后，利用Target Scan Human 7.1在线检测系统找到miR-32的靶基
【机 构】
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目的探讨miR-32通过靶向调控KLF4影响胶质瘤细胞增殖和侵袭的分子机制。
方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测miR-32在胶质细胞株(HA)和胶质瘤细胞株(U87、U373MG、U251)中的表达情况；进一步通过细胞增殖(MTT)、细胞侵袭及划痕实验判断miR-32对U87胶质瘤细胞株的影响。之后，利用Target Scan Human 7.1在线检测系统找到miR-32的靶基因，并利用双荧光素酶报告实验进一步验证。验证成功后采用RT-qPCR和蛋白质免疫印迹实验判断miR-32对靶基因KLF4 mRNA的调控，并采用MTT、细胞侵袭及划痕实验进一步判断靶基因KLF4对胶质瘤细胞株的影响。最后利用拯救实验判断miR-32如何调控靶基因KLF4进而影响胶质瘤的增殖和侵袭能力。
结果RT-qPCR结果显示，U87、U373MG及U251细胞株中miR-32的表达水平均显著高于HA细胞株(均P<0.01)。与转染miRNA-NC比较，转染miR-32 mimic的U87细胞株中miR-32的表达水平、增殖、侵袭及迁移能力均显著上调(均P<0.05)，而转染miR-32 inhibitor的表达水平、增殖、侵袭、迁移能力均显著下调(均P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告结果显示KLF4为miR-32的靶基因，miR-32过表达，细胞荧光素酶活性显著下降，KLF4表达下调；miR-32表达沉默，细胞荧光素酶活性显著上升，KLF4表达上调。U87、U373MG及U251细胞株中KLF4的表达明显低于HA细胞株(均P<0.01)。KLF4高表达时抑制胶质瘤细胞株的增殖、侵袭及迁移。拯救实验显示，KLF4表达沉默可逆转miR-32表达沉默胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的下调；KLF4过表达时可逆转miR-32过表达对胶质瘤细胞增殖和侵袭的促进作用。
结论miR-32通过抑制靶基因KLF4的表达促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。
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