【摘 要】
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目的 探究miR-219a-5p对人心肌细胞(HCM)氧化应激损伤的作用和机制.方法 利用H2O2建立HCM氧化应激模型,将HCM细胞随机分成4组:对照组、H2O2组(200μmol/L H2O2处理6 h),H2O2+NC mimic组(H2O2处理前转染对照mimic)和H2O2+miR-219a-5p组(H2O2处理前转染miR-219a-5p mimic).噻唑蓝(M T T)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR检测miR-219a-5p和KLF4 mRNA表达,We
【机 构】
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河南中医药大学第二附属医院 研究生办公室,郑州 450002;河南中医药大学第二附属医院 功能检查科,郑州 450002;河南中医药大学第二附属医院 心内科,郑州 450002
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目的 探究miR-219a-5p对人心肌细胞(HCM)氧化应激损伤的作用和机制.方法 利用H2O2建立HCM氧化应激模型,将HCM细胞随机分成4组:对照组、H2O2组(200μmol/L H2O2处理6 h),H2O2+NC mimic组(H2O2处理前转染对照mimic)和H2O2+miR-219a-5p组(H2O2处理前转染miR-219a-5p mimic).噻唑蓝(M T T)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR检测miR-219a-5p和KLF4 mRNA表达,Western blot检测Bax、Bcl-2和Krüppel样因子4(KLF4)蛋白表达,试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量.另外,利用荧光素酶报告基因实验确证miR-219a-5p与KLF4的相互作用关系.结果 与对照组相比,H2O2组中miR-219a-5p表达、细胞活力和SOD水平降低,细胞凋亡、Bax/Bcl-2、ROS和MDA水平以及KLF4表达升高(均P<0.05).与H2O2组相比,H2O2+miR-219a-5p组中miR-219a-5p表达、细胞活力和SOD水平升高,细胞凋亡、Bax/Bcl-2、ROS和MDA水平以及KLF4表达降低(均P0.05).荧光素酶实验结果显示,miR-219a-5p能够降低KLF4-野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05).结论 miR-219a-5p对H2O2诱导的HCM细胞氧化应激损伤具有缓解作用,这种作用可能是通过下调KLF4的表达发挥的.
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