【摘 要】
：
[目的]本文旨在建立JAZ与NINJA蛋白离体和活体互作以及2个蛋白复合体晶体筛选的体系,并获得2个蛋白复合体晶体.[方法]采用酵母双杂交和双分子荧光互补法用于活体条件下JAZ与NINJA蛋白互作区域的验证;在离体条件下,通过氢氘交换质谱(HDX)和Alpha Screen验证JAZ与NINJA蛋白的互作区域并进一步筛选2个蛋白互作的最小区域;使用原核(大肠杆菌)表达系统、亲和层析和凝胶过滤层析纯化等手段获得NINJA截短蛋白.将NINJA截短蛋白与JAZ多肽按照物质的量比为1:1.5混合孵育一段时间,通
【机 构】
：
南京农业大学植物保护学院,江苏 南京210095
论文部分内容阅读
[目的]本文旨在建立JAZ与NINJA蛋白离体和活体互作以及2个蛋白复合体晶体筛选的体系,并获得2个蛋白复合体晶体.[方法]采用酵母双杂交和双分子荧光互补法用于活体条件下JAZ与NINJA蛋白互作区域的验证;在离体条件下,通过氢氘交换质谱(HDX)和Alpha Screen验证JAZ与NINJA蛋白的互作区域并进一步筛选2个蛋白互作的最小区域;使用原核(大肠杆菌)表达系统、亲和层析和凝胶过滤层析纯化等手段获得NINJA截短蛋白.将NINJA截短蛋白与JAZ多肽按照物质的量比为1:1.5混合孵育一段时间,通过坐滴结晶方法进行复合体结晶,最终获得复合体晶体.[结果]成功创建了JAZ与NINJA离体和活体互作体系;获得JAZ多肽与NINJA(342～406)的复合体晶体的条件分别是0.2 mol·L-1 CaCl2·2H2O、0.1 mol·L-1 BIS-Tris(pH6.5)、45％2-甲基-2,4-戊二醇与0.2 mol·L-1醋酸铵、0.1 mol·L-1 Tris(pH8.5)、45％2-甲基-2,4-戊二醇.[结论]JAZ蛋白ZIM结构域的TIFY基序和羧基端与NINJA(342～406)是JAZ与NINJA蛋白互作所必需的;JAZ蛋白ZIM结构域是JAZ同源和异源互作所必需的;成功获得了JAZ与NINJA复合体晶体.
其他文献
[目的]本文旨在明确江苏省句容市葡萄炭疽病菌(Colletotrichum spp.)种类和不同种群葡萄炭疽病菌对多菌灵抗性的发生频率,探索其对苯并咪唑类杀菌剂抗性的遗传变化,为抗药性治理提供理论依据.[方法]从江苏省句容市白兔镇、后白镇、华阳镇和茅山镇等地采集大量葡萄炭疽病害样本,采用单孢纯化的方法获得葡萄炭疽分离株;对供试菌株的CAL(calmodulin)、GAPDH(glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase)、TUB2(β-tublin)等多基因位点进行扩
[目的]本文旨在鉴定茶树海藻糖-6-磷酸磷酸酶(TPP)基因家族,并探索其在茶树抵御低温胁迫调控中的功能.[方法]利用生物信息学的方法,对茶树TPP基因家族进行进化树、保守结构域、启动子顺式元件等特性进行分析;通过茶树TPP基因家族的组织特异性表达及其对低温胁迫的响应,初步探讨CsTPP的生物学功能.[结果]从茶树基因组中鉴定到12条具有Trehalose-PPase保守结构域的CsTPP序列.系统进化树分析表明,根据与拟南芥、水稻的TPP基因同源性差异比较,可以将CsTPP分成3组.启动子顺式元件分析表
[目的]本文旨在研究酿酒葡萄(Vinifera)MYB(myeloblastosis)调控基因的基因型和单倍型,并分析果实颜色与单倍型组成和数量之间的关系.[方法]利用特异性引物通过PCR技术对72个酿酒葡萄品种的MYBA1和MYBA2基因位点的基因型和单倍型组成进行鉴定,同时对果实的颜色进行调查.[结果]PCR结果显示,在MYBA1位点,有56个品种能检测到VvmybA1a,只有1个品种检测到VvmybA1b,有16个品种只检测到VvmybA1c,有13个品种检测到VlmybA1-3,仅有3个品种检测到
[目的]本文旨在揭示稻田施用dsRNA的环境稳定性,以便为dsRNA农药的高效应用和安全评估提供理论依据.[方法]以绿色荧光蛋白基因EGFP为模板合成dsRNA,利用点滴法处理稻苗叶片,利用定量添加法处理稻田水,定期取样测定.用痕量dsRNA简易检测方法分析水稻表面、水稻植株内和稻田水中的dsRNA残留动态.[结果]检测发现,在温室内,用dsRNA溶液(2μL含3000 pg)点滴水稻叶片后,叶面上的dsRNA半衰期为16 d;点滴处理后植株内的dsRNA浓度逐步升高,至12 d达到峰值,此后缓慢下降,叶
[目的]水稻乙醇酸氧化酶1(OsGLO1)是光呼吸中的关键酶,调控植物免疫信号分子过氧化氢(H2 O2)的产生.本研究旨在分析OsGLO1在稻瘟病抗性中的功能,揭示其调控机制.[方法]利用稻瘟病菌株Guy11分别侵染水稻野生型(ZH11)和OsGLO1基因过表达(OsGLO1-OE)以及沉默(cas9-glo1)的转基因水稻,观察抗病性表型,确定OsGLO1对抗病性的影响.使用稻瘟病菌GZ1(GFP标记)侵染水稻,比较菌丝扩增差异,明确OsGLO1抑制稻瘟病菌侵染后扩展的能力.分别通过定性和定量试验观察和
[目的]本文旨在建立茶用菊品种的综合评价体系,筛选出适合高产、适应性强的优良茶用菊品种.[方法]基于40个茶用菊品系的田间性状和花部性状,采用专家咨询法、层次分析法以及K-means聚类分析法构建茶用菊的综合评价体系.[结果]共确定10个影响茶用菊产量和品质性状的关键指标.应用层次分析法确定各个指标的权重,其中单株花数对茶用菊产量影响最大,其权重为0.301,田间适应性以及舌状花数的影响次之,其权重分别为0.172和0.119.基于高产、适应性强的目标,应用K-means聚类分析法将40个茶用菊品系分为优
[目的]本试验旨在探究肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导对小鼠乳腺上皮细胞凋亡和程序性坏死的影响.[方法]体外培养小鼠乳腺上皮细胞系(HC-11细胞)并分为4个处理组:对照(Ctrl)组、TNF-α(T)组、TNF-α+CHX(环己酰亚胺)(TC)组和TNF-α+CHX+Z-VAD-FMK(Caspase家族抑制剂)(TCZ)组.向细胞中加入TNF-α(20、50、100 ng·mL-1)、CHX(4μmol·L-1)、Z-VAD-FMK(20μmol·L-1),分别处理12 h和24 h,检测细胞活力和细
[目的]本试验旨在探讨宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)对猪胎盘细胞增殖、凋亡及抗氧化基因和蛋白表达的影响.[方法]从刚分娩的母猪中选择正常初生重(normal birth weight,NBW)和IUGR仔猪对应的胎盘各5个,分为对照组和宫内发育迟缓组.采用免疫组化法检测胎盘细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,采用TUNEL法检测胎盘细胞凋亡,采用荧光定量PCR检测胎盘NRF2、HO-1、NQO1、SOD1、SOD2、GCLC和GCLM基因的表达,
[目的]小菜蛾是十字花科植物专食性昆虫,以芥子油苷为重要味觉信号来识别寄主植物进行产卵.本研究旨在证实芥子油苷对小菜蛾雌蛾产卵的刺激作用,并进一步明确前足跗节和触角在芥子油苷感受中的作用,为深入研究芥子油苷的感受机制奠定基础.[方法]利用小罩笼法并以封口膜为产卵介质,通过测定小菜蛾在芥子油苷(粗提液)处理和对照封口膜间向芥子油苷的产卵偏好性(选择指数),确定芥子油苷对小菜蛾雌蛾产卵的刺激作用;分别以封口膜和植物叶片为产卵介质,通过比较小菜蛾3个处理(酸蚀前足跗节、切除触角、切除触角+酸蚀前足跗节)的产卵选
[目的]日本晚樱(Cerasus serrulata var.lannesiana),花色多样,花期较晚,具有较大开发前景.日本晚樱优良新品种的培育,对丰富和开发国产樱花品种具有重要的意义.[方法]以\'阳光\'C.campanulata\'Yokou\'与\'松前红绯衣\'C.serrulata var.lannesiana\'Matsumae-benihigoromei\'杂交产生的种子实生苗为基础,观察与研究其花部器官的形态变化.[结果]\'名贵红\'为 自主