论文部分内容阅读
【摘 要】本实验以孕育丹为研究对象，对制剂中羟基红花黄色素A的测定方法进行研究。采用HPLC法测定孕育丹中羟基红花黄色素A的含量，样品用25 %甲醇超声提取；以C18柱（250mm×4.6mm，5μm）为固定相；甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72）为流动相；流速为1.0 mL/min；检测波长403nm；柱温：25℃。方中的羟基红花黄色素A获良好分离，在0.013～0.130mg/ml范围内呈现良好的线性关系（r=0.9998），平均加样回收率为98.54%，RSD为1.06%。所建方法简单、准确、重复性好，可用于孕育丹的质量控制。
【关键词】孕育丹；红花；羟基红花黄色素A；高效液相色谱法
【中图分类号】R286 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0045-02
本制剂孕育丹主要由枸杞子、香附、三七、红花、白术等数味中药组成。具有滋补气血、调经疏肝的功效。临床上主要用于月经不调，赤白带下，贫血衰弱，宫寒不孕，气血淤滞等妇科疾病。该制剂系直径3mm～5 mm的小蜜丸，服用方便。为保证制剂质量，确保疗效，通过多次实验，采用高效液相色谱法对主药红花的主要成分羟基红花黄色素A含量进行测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津高效液相色谱仪，LC-20AT输液泵，SPD-20A紫外可见光检测器，STL-20A自动进样器，LCsolution色谱工作站；MettlerAG285型电子天平，MettlerPB1502-S型精密天平，28HVLRASOTH超声处理器。
1.2 试剂与试药
磷酸为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。对照品：羟基红花黄色素 A（批号111637-200704，供含量测定用），所有对照药材、对照品均购自中国药品生物制品检定所。孕育丹 （批号： 061129，061207，070121；供试品来源：中国人民解放军第458医院 ），阴性对照样品系除去处方中红花药材后按该工艺方法制备而成。
2 方法与结果
2.1 含量测定
2.1.1 色谱条件
色谱柱：C18柱（250mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72）；检测波长：403 nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量为3μl。理论板数按羟基红花黄色素A的峰计算不低于3000。
2.2.2 对照品溶液制备
取红花羟基黄色素A对照品适量，精密称定，加入25%甲醇进行溶解，定量稀释成每1mL含0.13mg的溶液，即得。
2.1.3 供试品溶液制备
取装量差异项下的供试品20粒，研匀，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL进行溶解，称定重量，超声40min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。
2.1.4 测定法
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各3μl，用高效液相色谱仪测定，即得。
2.1.5 线性关系考察
取红花羟基黄色素A对照品适量，精密称定，加25%甲醇溶解，并定量稀释制成每1 mL中含羟基红花黄色素A 0.13mg的溶液作为储备液。精密吸取储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL置1 mL量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，制成每1mL分别含羟基红花黄色素A0.013、0.026、0.039、0.078、0.104 mg的溶液。精密吸取上述溶液及储备液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定。以峰面积（Y）对进样量（X）（单位：μg）进行回归分析，试验结果表明：羟基红花黄色素A在0.013～0.130mg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y =3.51429×106X-9635.99，r=0.9998。
2.1.6 精密度试验
取供试品溶液（批号070121），连续进样6次，每次进样量3μl，测定。测定结果表明对羟基红花黄色素A测定的精密度良好。峰面积平均值209433，RSD为0.36%。ssss
2.1.7 稳定性试验
将供试品溶液（批号070121），分别在0，2，4，8，12，24h进样测定。试验结果：羟基红花黄色素A峰面积平均值为205090，RSD为1.9%。结果表明在24h内的峰面积基本稳定。
2.1.8 重复性试验
取供试品（批号070121） 5份，每份取约1.0 g，精密称定，分别按正文含量测定项下方法操作并测定每份的含量。测得平均含量为2.8101mg/g，RSD为0.40%，说明该方法重复性良好。
2.1.9 加样回收率试验
取已知羟基红花黄色素A含量的孕育丹（批号070121）20粒，研细，混匀，取6份，每份约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入一定量的羟基红花黄色素A对照品，制成模拟样品，精密加入25%甲醇50ml，称定重量，超声40 min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足重量，摇匀，滤过，取滤液，按正文含量测定项下的方法测定含量，计算回收率，结果见表1。
【关键词】孕育丹；红花；羟基红花黄色素A；高效液相色谱法
【中图分类号】R286 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0045-02
本制剂孕育丹主要由枸杞子、香附、三七、红花、白术等数味中药组成。具有滋补气血、调经疏肝的功效。临床上主要用于月经不调，赤白带下，贫血衰弱，宫寒不孕，气血淤滞等妇科疾病。该制剂系直径3mm～5 mm的小蜜丸，服用方便。为保证制剂质量，确保疗效，通过多次实验，采用高效液相色谱法对主药红花的主要成分羟基红花黄色素A含量进行测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津高效液相色谱仪，LC-20AT输液泵，SPD-20A紫外可见光检测器，STL-20A自动进样器，LCsolution色谱工作站；MettlerAG285型电子天平，MettlerPB1502-S型精密天平，28HVLRASOTH超声处理器。
1.2 试剂与试药
磷酸为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。对照品：羟基红花黄色素 A（批号111637-200704，供含量测定用），所有对照药材、对照品均购自中国药品生物制品检定所。孕育丹 （批号： 061129，061207，070121；供试品来源：中国人民解放军第458医院 ），阴性对照样品系除去处方中红花药材后按该工艺方法制备而成。
2 方法与结果
2.1 含量测定
2.1.1 色谱条件
色谱柱：C18柱（250mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72）；检测波长：403 nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量为3μl。理论板数按羟基红花黄色素A的峰计算不低于3000。
2.2.2 对照品溶液制备
取红花羟基黄色素A对照品适量，精密称定，加入25%甲醇进行溶解，定量稀释成每1mL含0.13mg的溶液，即得。
2.1.3 供试品溶液制备
取装量差异项下的供试品20粒，研匀，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL进行溶解，称定重量，超声40min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。
2.1.4 测定法
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各3μl，用高效液相色谱仪测定，即得。
2.1.5 线性关系考察
取红花羟基黄色素A对照品适量，精密称定，加25%甲醇溶解，并定量稀释制成每1 mL中含羟基红花黄色素A 0.13mg的溶液作为储备液。精密吸取储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL置1 mL量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，制成每1mL分别含羟基红花黄色素A0.013、0.026、0.039、0.078、0.104 mg的溶液。精密吸取上述溶液及储备液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定。以峰面积（Y）对进样量（X）（单位：μg）进行回归分析，试验结果表明：羟基红花黄色素A在0.013～0.130mg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y =3.51429×106X-9635.99，r=0.9998。
2.1.6 精密度试验
取供试品溶液（批号070121），连续进样6次，每次进样量3μl，测定。测定结果表明对羟基红花黄色素A测定的精密度良好。峰面积平均值209433，RSD为0.36%。ssss
2.1.7 稳定性试验
将供试品溶液（批号070121），分别在0，2，4，8，12，24h进样测定。试验结果：羟基红花黄色素A峰面积平均值为205090，RSD为1.9%。结果表明在24h内的峰面积基本稳定。
2.1.8 重复性试验
取供试品（批号070121） 5份，每份取约1.0 g，精密称定，分别按正文含量测定项下方法操作并测定每份的含量。测得平均含量为2.8101mg/g，RSD为0.40%，说明该方法重复性良好。
2.1.9 加样回收率试验
取已知羟基红花黄色素A含量的孕育丹（批号070121）20粒，研细，混匀，取6份，每份约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入一定量的羟基红花黄色素A对照品，制成模拟样品，精密加入25%甲醇50ml，称定重量，超声40 min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足重量，摇匀，滤过，取滤液，按正文含量测定项下的方法测定含量，计算回收率，结果见表1。