【摘 要】
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为制备柯萨奇病毒A组4型（coxsackievirus A4,CV-A4）单克隆抗体并鉴定其生物学特性，同时为初步建立CV-A4抗原定量ELISA检测法，用于CV-A4候选疫苗研制中的抗原定量检测及质量控制，将纯化后的CV-A4全病毒颗粒免疫BALB/c小鼠，采用常规细胞融合技术、中和试验和ELISA获得CV-A4单克隆抗体；建立双抗体夹心ELISA检测法并进行方法学验证，用于检测手足口病（han
【基金项目】
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国家“重大新药创制”科技重大专项（2015ZX09102021）； 湖北省技术创新重大专项（2017ACA078）；
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为制备柯萨奇病毒A组4型（coxsackievirus A4,CV-A4）单克隆抗体并鉴定其生物学特性，同时为初步建立CV-A4抗原定量ELISA检测法，用于CV-A4候选疫苗研制中的抗原定量检测及质量控制，将纯化后的CV-A4全病毒颗粒免疫BALB/c小鼠，采用常规细胞融合技术、中和试验和ELISA获得CV-A4单克隆抗体；建立双抗体夹心ELISA检测法并进行方法学验证，用于检测手足口病（hand-foot-mouth disease, HFMD）多价疫苗中CV-A4抗原水平。结果显示，制备了型特异性CV-A4单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA检测法，检测范围为62.5～4 000.0 ng/mL;高、中、低3个浓度样本准确度验证，回收率为91.8%～121.9%;重复性验证，变异系数分别为3.4%、11.9%和8.6%;中间精密度验证，变异系数分别为1.8%、9.4%和6.5%;耐用性验证，回收率为97.3%～104.1%;包被微孔板37℃放置3 d,样本回收率为98.5%～119.2%;在特异度验证中，双抗体夹心ELISA检测法仅识别CV-A4抗原，与CV-A4以外的抗原均无交叉反应。由此，新建立的双抗体夹心ELISA检测法可用于纯化过程样本的CV-A4抗原检测，也可定量分析HFMD多价疫苗中CV-A4组分，这为多价疫苗的研制奠定了基础。
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