【摘 要】
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目的 探讨miR-34a的表达水平对乳腺癌细胞多柔比星(DOX)耐药性的影响及其分子机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-34a在乳腺癌细胞(MCF-7)和DOX耐药细胞株(MCF-7/ADR)中的表达,通过转染miR-34a mimics或者miR-34a inhibitor调控其表达水平;CCK-8法筛选DOX处理细胞的半数有效抑制浓度(IC50),检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;ENCORI网站预测miR-34a靶基因Akt的结合位点;Western blot检测蛋
【机 构】
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遵义医科大学第二附属医院头颈肿瘤科 563003;遵义医科大学附属医院头颈肿瘤科;遵义医科大学第二附属医院头颈肿瘤科 563003;遵义医科大学附属医院头颈肿瘤科
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目的 探讨miR-34a的表达水平对乳腺癌细胞多柔比星(DOX)耐药性的影响及其分子机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-34a在乳腺癌细胞(MCF-7)和DOX耐药细胞株(MCF-7/ADR)中的表达,通过转染miR-34a mimics或者miR-34a inhibitor调控其表达水平;CCK-8法筛选DOX处理细胞的半数有效抑制浓度(IC50),检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;ENCORI网站预测miR-34a靶基因Akt的结合位点;Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、Bcl-2及Bax蛋白的表达.结果 与MCF-7细胞株相比,MCF-7/ADR细胞株中miR-34a的基础表达水平降低(P<0.01).与NC inhibitor组相比,miR-34a inhibitor组中miR-34a表达水平降低(P<0.01).DOX处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞的IC50分别为0.895 mg/L和13.607 mg/L.miR-34a与Akt基因3\'UTR区可能存在结合位点.经DOX处理后,miR-34a inhibitor组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率降低,p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达水平升高(P<0.05).与NC mimics组相比,miR-34a mimics组中miR-34a表达水平升高(P<0.01).经DOX处理后,miR-34a mimics组中细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白水平降低(P<0.01).结论 miR-34a在MCF-7/ADR中的表达下调,可能通过激活Akt/Bcl-2通路,减少细胞凋亡,进而增强细胞对DOX的耐药性.
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