基于N基因的RT-LAMP技术检测PEDV、TGEV、PDCoV三种猪腹泻冠状病毒的研究

来源 :中国动物传染病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yideng
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本研究成功建立了检测PEDV、TGEV、PDCoV三种猪冠状病毒的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为现场快速诊断提供技术支持。根据GenBank公布的PEDV、TGEV、PDCoV的N基因保守序列作为靶序列设计了3套LAMP检测引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测,分别建立了三种快捷、敏感的猪冠状病毒RT-LAMP检测方法。结果表明,所建立的PEDV、TGEV、PDCoV三种冠状病毒RT-LAMP检测方法的最佳反应温度分别为65℃、63℃、63℃,三种检测方法均可在45min左右完成恒温扩增,扩增出特异性阶梯状条带,且不依赖于PCR仪等昂贵设备,仅需普通恒温装置即可反应。所建立的检测方法对PEDV、TGEV、PDCoV分别可以达到的检测下限为20拷贝/μL、23拷贝/μL、10拷贝 /μL,敏感性较好;所建立的三种检测方法分别只检测出PEDV、TGEV、PDCoV,且与常见的猪源性病毒均无交叉反应,特异性好。用所建立的三种RT-LAMP检测方法对45份猪腹泻病料进行检测,PEDV、TGEV、PDCoV阳性率分别为33.33%(15/45)、22.22%(10/45)、13.33%(6/45),均比常规RT-PCR检测阳性率高。与常规RT-PCR相比较,本研究建立的方法操作简便快速、经济且检测设备门槛低,更适用于基层临床检测。
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