【摘 要】
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目的 探讨CCL5-siRNA对高转移性人乳腺癌细胞生物学行为的影响.方法 合成特异性CCL5-siRNA并克隆入慢病毒表达载体pGCSIL-GFP,将重组CCL5-siRNA慢病毒感染高转移性人乳腺癌细胞系MDA-MB-231设为KD组,另设阴性对照组和未感染组;分别采用实时定量聚合酶链反应和Western blot方法检测CCL5-siRNA对CCL5表达的作用;用噻唑蓝比色法、流式细胞术、克
【机 构】
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目的 探讨CCL5-siRNA对高转移性人乳腺癌细胞生物学行为的影响.方法 合成特异性CCL5-siRNA并克隆入慢病毒表达载体pGCSIL-GFP,将重组CCL5-siRNA慢病毒感染高转移性人乳腺癌细胞系MDA-MB-231设为KD组,另设阴性对照组和未感染组;分别采用实时定量聚合酶链反应和Western blot方法检测CCL5-siRNA对CCL5表达的作用;用噻唑蓝比色法、流式细胞术、克隆形成试验和Boyden小窒穿透试验观察细胞的增殖、周期、体外聚集和侵袭力的改变.结果 CCL5-siRNA慢病毒可显著降低MDA-MB-231细胞CCL5的表达,改变细胞形成克隆和运动侵袭的能力,但对细胞增殖的影响不明显.与阴性对照组(1.00±0.07)和未感染组(0.88±0.15)比较,KD组细胞CCL5 mRNA的表达下降为(0.18±0.03),P<0.01.在上样量相同的条件下,与阴性对照组(1.82±0.18)比较,KD组CCL5蛋白表达降低为(0.33±0.13),P<0.01.细胞克隆计数:与阴性对照组(0.97±0.09)和未感染组(1.04±0.07)比较,KD组细胞的克隆数降为(0.33±0.10),P<0.05;穿膜细胞计数:KD组(38±15)明显少于阴性对照组(77±11)和末感染组(69±9),P<0.05.嚷唑蓝比色实验和流式细胞分析提示:KD组细胞的增殖情况与阴性对照组、未感染组相比无明显差别.三组PI值分别为0.48±0.02、0.44±0.05及0.47±0.02(P>0.05).结论 慢病毒介导的CCL5-siRNA可显著抑制高转移性人乳腺癌细胞的克隆形成和运动侵袭能力,但对其增殖活性无明显影响。
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