【摘 要】
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目的 探讨siRNA抑制登革病毒复制的分子机制. 方法 用登革病毒感染Vero细胞,实时荧光定量PCR检测稳定表达Si-DENV的Vero细胞系上清中病毒含量,并通过流式细胞技术检测感染细
【机 构】
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广州医科大学附属第三医院,广东广州,510150;广州市疾病预防控制中心;中山大学中山医学院
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目的 探讨siRNA抑制登革病毒复制的分子机制. 方法 用登革病毒感染Vero细胞,实时荧光定量PCR检测稳定表达Si-DENV的Vero细胞系上清中病毒含量,并通过流式细胞技术检测感染细胞的比例,利用细胞免疫荧光法和Western blot方法检测登革病毒蛋白表达情况. 结果 Si-DENV能够抑制登革病毒在细胞内的复制以及病毒释放,与对照组相比,感染后第3～7 d,上清中病毒含量的差异均具有统计学意义(P＜0.01).感染后第7d,Si-DENV组登革病毒感染细胞的比例仅为4.48％,对照组感染细胞比例为81.06％.实时荧光RT-PCR结果表明Si-DENV组病毒基因组RNA及负链RNA含量显著减少,与Si-NC组相比差异具有统计学意义(P＜0.01),细胞免疫荧光法和Western blot实验证明Si-DENV下调prM、E、NS1等病毒蛋白在Vero细胞中的表达水平. 结论 利用慢病毒转染Si-DENV能抑制登革病毒在Vero细胞中的复制,为登革病毒的防治提供了新的思路.
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