基于miR-223-3p研究淫羊藿苷治疗大鼠颅脑外伤后神经损伤的作用机制

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目的 基于miR-223-3p探讨淫羊藿苷治疗大鼠颅脑外伤神经损伤的作用机制.方法 随机选取70只大鼠,建立局部脑挫裂伤模型,将建模成功的60只大鼠随机分为模型组、淫羊藿苷(30 mg/kg)组、淫羊藿苷(30 mg/kg)+阴性对照组和淫羊藿苷(30 mg/kg) +miR-223-3p antagomir组,每组15只,另取15只大鼠作为对照组.给予相应药物进行干预,末次干预2h后,对各组大鼠进行改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,mNSS);测定各组大鼠脑组织含水量;采用ELISA法检测各组大鼠脑组织白细胞介素-18 (interleukin-18,IL-18)和IL-1β水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠脑组织病理变化;采用TUNEL染色法观察各组大鼠脑组织神经元凋亡情况;采用qRT-PCR法检测各组大鼠脑组织miR-223-3p和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)mRNA表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠脑组织NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、B淋巴细胞瘤2 (B-cell lymphoma2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associatedX protein,Bax)蛋白表达情况;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-223-3p对NLRP3的靶向性.结果 与模型组比较,淫羊藿苷组大鼠mNSS显著降低(P<0.05),脑组织含水量显著降低(P<0.05),脑组织IL-18和IL-1β水平显著降低(P<0.05);脑组织损伤面积和红细胞数减少;神经元细胞凋亡指数显著降低(P<0.05);脑组织miR-223-3p mRNA表达水平升高,NLRP3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);脑组织NLRP3、Caspase-1和Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05).与淫羊藿苷组比较,淫羊藿苷+miR-223-3p antagomir可显著逆转上述指标(P<0.05).双荧光素酶报告结果显示,miR-223-3p可靶向调控NLRP3.结论 淫羊藿苷对大鼠颅脑外伤神经损伤具有改善作用,其作用机制可能与调控miR-223-3p从而靶向抑制NLRP3表达、抑制炎性反应、减少神经元细胞凋亡有关.
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