探讨微RNA(microRNA,miR)-147b在食管鳞状细胞癌(以下简称"鳞癌")中的表达及其在细胞增殖、细胞周期和侵袭中的分子机制。
方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测食管鳞癌组织和细胞中miR-147b的表达。将阴性对照(NC)和miR-147b抑制剂转染食管鳞癌EC1和EC9706细胞。试验分为两组:NC组和miR-147b抑制剂组,采用qPCR检测上述细胞中miR-147b的表达,采用CCK-8、流式细胞术和Transwell小室检测分别检测miR-147b表达下调对食管鳞癌细胞增殖、细胞周期和侵袭的影响。利用双荧光素酶报告载体分析其直接作用的靶基因。采用qPCR和Western印迹检测miR-147b表达下调对靶基因NDUFA4表达的影响,进一步利用qPCR检测NDUFA4在食管鳞癌组织中的表达,并分析其表达与miR-147b表达的相关性。
结果食管鳞癌组织(3.03±0.27)和细胞中miR-147b的相对表达水平均显著高于癌旁组织(1.00±0.01)和正常食管上皮细胞,差异均有统计学意义(均P<0.01),并且miR-147b高表达与食管鳞癌患者的临床分期、浸润深度、组织学分级及淋巴结转移均密切相关(均P<0.05),临床分期、淋巴结转移和miR-147b是食管鳞癌患者的独立预后因素。miR-147b表达下调能显著抑制食管鳞癌细胞的增殖、静止细胞周期在G0/G1期和降低其侵袭能力。NDUFA4是miR-147b直接作用的靶基因,miR-147b抑制剂显著增加食管鳞癌EC1和EC9706细胞中NDUFA4的表达。NDUFA4在食管鳞癌组织中表达显著下调,其与miR-147b的表达负相关(r=-0.765,P<0.001)。
结论miR-147b表达的下调显著抑制食管鳞癌的增殖和侵袭能力,且可以改变其细胞周期分布。