【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)GK-IT1在食管鳞状癌细胞株中的表达及对食管鳞状癌细胞株增殖行为的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time
【机 构】
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400016重庆,重庆医科大学附属第一医院心胸外科
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目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)GK-IT1在食管鳞状癌细胞株中的表达及对食管鳞状癌细胞株增殖行为的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测27对食管鳞状癌组织和癌旁正常组织中lncRNA GK-IT1 的表达.针对lncRNA GK-IT1 设计构建小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),在TE1细胞中转染构建GK-IT1敲低模型.采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期的变化,Western blot实验验证细胞周期相关蛋白的表达变化.结果 食管鳞状癌组织中lncRNA GK-IT1的表达量明显高于癌旁组织(P＜0.01).在TE1和TE10细胞中,通过转染,成功构建了敲低lncRNA GK-IT1的细胞表达载体.平板克隆实验、EDU实验以及CCK-8实验结果显示,与对照组相比,敲低lncRNA GK-IT1能够显著抑制细胞的增殖(P＜0.01).流式细胞检测结果发现敲低lncRNA GK-IT1能够增加细胞的凋亡(P＜0.01).使用荧光原位杂交实验探究lncRNA GK-IT1的亚细胞定位,发现GK-IT1主要分布在细胞质.流式细胞检测结果发现敲低lncRNA GK-IT1能够引起TE-1、TE-10细胞G1/S期阻滞.通过生物信息学分析,lncRNA GK-IT1可能与CDK4、CCND1蛋白结合,Western blot实验验证结果显示,lncRNA GK-IT1基因敲除后,CDK4和CCND1蛋白表达降低.结论 敲低lncRNA GK-IT1可以导致细胞周期阻滞,抑制食管鳞状癌细胞增殖并且促进细胞凋亡,可能作为食管鳞状细胞治疗的潜在靶点.
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