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研究糖基化终末产物(AGEs)诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能的变化及相关机制。
方法SPF级雄性Wistar大鼠20只，7～8周龄，体重260～280 g，分离培养大鼠视网膜内皮细胞，采用免疫荧光染色、流式细胞术和体外形成毛细血管样网络结构的方法进行鉴定。视网膜内皮细胞在AGEs刺激后，用噻唑蓝(MTT)法分析细胞的增殖能力；用膜连蛋白Ⅴ/碘化丙啶(Annexin Ⅴ/PI)双染法检测细胞凋亡；采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测细胞AGEs受体、人蛋白激酶C(PKC)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化。采用t检验进行统计学分析。
结果分离纯化的大鼠视网膜内皮细胞表达血管性血友病因子(vWF)并在人工基膜上形成毛细血管网络结构。AGEs以时间和剂量依赖的方式抑制大鼠视网膜内皮细胞增殖能力，在200 mg/L的AGEs组培养至第5天时细胞增殖能力低于对照组(t=8.9，P<0.05)，7 d和9 d时抑制作用更明显(t值分别为15.7和46.1，均P<0.01)。400 mg/L AGEs组在第3天开始出现细胞增殖减慢(t=12.5，P<0.05)，从第5天开始增殖速度明显低于对照组(t值分别为22.4、41.5和77.7，均P<0.01)。并且AGEs诱导视网膜内皮细胞凋亡。进一步分析发现AGEs上调了大鼠视网膜内皮细胞AGEs受体、PKC、ICAM-1和iNOS的mRNA表达(t值分别为91.8、9.22、16和42，均P<0.01)和蛋白水平的表达(t值分别为20.2、12.3、7.7和13.9，均P<0.01)。
结论AGEs可能通过上调AGEs受体诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能的改变。