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目的 建立汉滩病毒（Hantaan virus,HTNV）、汉城病毒（Seoul virus,SEOV）、普马拉病毒（Puumala virus,PUUV）、多不拉伐病毒（Dobrava virus,DOBV）4种引起肾综合征出血热病毒的快速筛查、诊断方法。方法 分析确定上述4种病毒的保守基因作为靶标区域，设计4组特异性引物和探针，组合成两组双重荧光重组酶介导等温扩增（RTRAA）反应体系。分别用4种病毒的体外转录RNA验证方法的灵敏度，采用登革病毒I-Ⅳ型、基孔肯雅病毒、黄热病毒疫苗株、乙型脑炎病毒、甲型流感病毒3型、甲型H1N1流感病毒以及乙型流感病毒核酸及4种病毒体外转录RNA进行特异性验证，分别采用中浓度（10~4拷贝/μl）、低浓度（102拷贝/μl）的体外转录RNA验证双检测体系的重复性。结果 通过生物信息学分析，将4种病毒组合成HTNV+SEOV组合以及PUUV+DOBV双重荧光RT-RAA检测体系，均在39℃检测15 min，检测灵敏度为1～102拷贝/μl，均与其他病毒无交叉反应。4种病毒对10~4拷贝/μl体外转录RNA检出率均达到100.0%,102拷贝/μl体外转录RNA检出率也能达到66.7%。结论 本研究建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性，可用于人体及鼠类样本的诊断与筛查