【摘 要】
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目的 克隆、表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CS-CP),并评价其免疫学诊断效果.方法 根据已知的CS-CP(GenBank序列号:AF093242)基因序列设计引物,从华支睾吸虫成虫总cDNA中扩增
【机 构】
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江苏省寄生虫病防治研究所;卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室;江苏省寄生虫分子生物学重点实验室;江苏省寄生虫病学重点学科,无锡214064;苏州大学基础医学院寄生虫学教研室
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目的 克隆、表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CS-CP),并评价其免疫学诊断效果.方法 根据已知的CS-CP(GenBank序列号:AF093242)基因序列设计引物,从华支睾吸虫成虫总cDNA中扩增该目的片段,克隆入真核表达载体pPIC9K,转化至巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,甲醇诱导表达、纯化；采用Western blot技术鉴定该重组蛋白；用纯化的重组CS-CP(rCS-CP)免疫小鼠,ELISA法检测抗体效价；应用Dot-ELISA法和Western blot法评估该重组蛋白的诊断效果.结果 从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增获得长度为927 bp的CS-CP基因,并成功进行了真核表达、纯化,纯化的rCS-CP免疫小鼠后的血清能被华支睾吸虫成虫可溶性抗原识别,其血清抗体效价达1∶64000;采用该重组蛋白建立的DotELISA法检测华支睾吸虫病人的敏感性为91.7％(55/60),检测正常人的特异性为97.6％ (82/84)；Western blot分析显示,rCS-CP与日本血吸虫病人血清无交叉反应,与卫氏并殖吸虫病人交叉反应率为20.0％(2/10).结论 rCS-CP具有较好的诊断效果,是华支睾吸虫重组蛋白中一个有潜在诊断价值的抗原.
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