【摘 要】
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为探究鼠伤寒沙门菌（Salmonella Typhimurium）VI型分泌系统（T6SS）分泌的效应蛋白Rhs对该菌生物学特性的影响，本研究利用Red同源重组技术构建了鼠伤寒沙门菌rhs1和rhs2基因缺失株CVCC541Δrhs1和CVCC541Δrhs2，同时构建了基因回补菌株C-Δrhs1和C-Δrhs2，并经PCR和测序鉴定正确后，测定了鼠伤寒沙门菌亲本株和缺失株的遗传稳定性、生长曲线，
【基金项目】
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国家重点研发计划（2016YFD0500703、2018YFD0502006）；
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为探究鼠伤寒沙门菌（Salmonella Typhimurium）VI型分泌系统（T6SS）分泌的效应蛋白Rhs对该菌生物学特性的影响，本研究利用Red同源重组技术构建了鼠伤寒沙门菌rhs1和rhs2基因缺失株CVCC541Δrhs1和CVCC541Δrhs2，同时构建了基因回补菌株C-Δrhs1和C-Δrhs2，并经PCR和测序鉴定正确后，测定了鼠伤寒沙门菌亲本株和缺失株的遗传稳定性、生长曲线，结果显示，缺失株经过多次传代后仍然具有稳定的遗传性；Rhs效应因子缺失对细菌的生长未造成明显影响。进一步利用各菌株感染Hela细胞，对菌株黏附力和侵袭力进行测定，结果显示，与亲本株相比，缺失株CVCC541Δrhs1和CVCC541Δrhs2对Hela细胞的黏附力无明显影响，但侵袭力分别提高了4.9倍和3.4倍。利用各菌株感染RAW264.7巨噬细胞，检测各株菌在RAW264.7细胞内的存活力，结果显示缺失株CVCC541Δrhs1和CVCC541Δrhs2在RAW264.7细胞内存活力分别提高了7.8倍和5.9倍。将各菌经株腹腔注射感染小鼠，检测其对小鼠的半数致死量(LD50)，结果显示，亲本株的LD50为2.53×10~6cfu/mL，缺失株CVCC541Δrhs1、CVCC541Δrhs2的LD50分别为1.31×10~7cfu/mL和5.40×10~6cfu/mL,LD50分别下降了5.2倍和2.1倍。本研究首次证实效应蛋白Rhs会影响鼠伤寒沙门菌的侵袭力和细胞内的生存能力，同时也会降低细菌的毒力，在鼠伤寒沙门菌感染过程中发挥了作用，该结果为阐释鼠伤寒沙门菌的致病机制提供了参考。
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