【摘 要】
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【目的】探讨VI型分泌系统（T6SS）效应蛋白Clpv在鼠伤寒沙门菌致病过程中的功能。【方法】以鼠伤寒沙门菌SL1344基因组为模板克隆clpv基因，并比较与其他革兰氏阴性菌（台湾假单胞菌、植生拉乌尔菌、鳗利斯顿氏菌、菠萝多源菌、粘放线菌和大肠埃希菌）同源性；将clpv基因克隆至pEGFP-N1载体构建重组质粒pEGFP-Clpv，利用Western-blotting、q-PCR、荧光显微镜以及流
【机 构】
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河南科技大学洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金（31572489）； 河南科技大学博士研究启动专项基金（134980104）；
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【目的】探讨VI型分泌系统（T6SS）效应蛋白Clpv在鼠伤寒沙门菌致病过程中的功能。【方法】以鼠伤寒沙门菌SL1344基因组为模板克隆clpv基因，并比较与其他革兰氏阴性菌（台湾假单胞菌、植生拉乌尔菌、鳗利斯顿氏菌、菠萝多源菌、粘放线菌和大肠埃希菌）同源性；将clpv基因克隆至pEGFP-N1载体构建重组质粒pEGFP-Clpv，利用Western-blotting、q-PCR、荧光显微镜以及流式细胞术检测蛋白表达、定位及诱导小鼠巨噬细胞M1型和M2型极化水平。【结果】clpv基因全长为2 637 bp， 与台湾假单胞菌的同源性最高；Western-blotting、q-PCR和免疫荧光检测表明重组蛋白大小约120 kDa，在细胞中有明显绿色荧光并且主要定位于细胞膜；q-PCR和流式细胞术结果发现Clpv转染组巨噬细胞M1型极化显著增加（P＜0.01），M2型巨噬细胞极化显著减少（P＜0.01）。【结论】成功克隆表达鼠伤寒沙门菌T6SS效应蛋白Clpv，并明确其胞内表达定位以及对巨噬细胞极化影响。
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