苦木农用抑菌成分研究

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苦木(Picrasma quassioides)是苦木科苦木属植物,属于落叶乔木,在我国和世界范围内都具有广泛的分布,在我国主要分布于南部省份。苦木属于中国的传统药材,具有广泛的药用活性,但苦木及其提取物的农用抑菌活性鲜见报道。为了研究苦木作为农用杀菌剂的应用可行性,本文以生物活性追踪为指引,采用硅胶柱层析,凝胶柱层析及反相高效液相色谱制备技术,对苦木中活性成分进行了分离,采用波谱技术鉴定了其化学结构,评价了5种生物碱对12种植物致病真菌及3种植物致病细菌的抑菌活性,研究了苦木中生物碱的提取工艺。本文采用硅胶柱层析,凝胶层析和反相制备色谱技术分离到9个化合物,并采用核磁共振波谱及质谱等波谱技术对其进行了结构鉴定。其中生物碱类物质5种,分别是铁屎米酮(1)、5-甲氧基-4-羟基铁屎米酮(2)、4,5-甲氧基铁屎米酮(3)、1-甲酯基-β-卡巴林(4)、1-甲氧基-3-甲酯基-β-卡巴林(5),其它成分4种,分别是大豆苷元(6)、芒柄花黄素(7)、6-甲氧基-7,8-亚甲二氧机香豆素(8)以及苦木素D(9),其中苦木素D(9)为苦木中的特征组份。化合物5、6、7、8均为首次从苦木中得到,其中化合物5(1-甲氧基-3-甲酯基-β-卡巴林)为首次在自然界分离得到的化合物。本研究分别用菌丝生长速率法、滤纸片扩散法、枝条活体实验以及苹果果实活体实验等方法系统评价了苦木的农用抑菌活性。发现本次分离得到的5种生物碱均具有一定的抑菌效果,其中铁屎米酮(1)的抑菌效果最好,对12种供试的植物病原真菌EC50在1.49~8.80 mg/L之间,其中对苹果树腐烂病的病原菌(V.mali)的抑菌活性最好,其EC50仅为1.49 mg/L。铁屎米酮对植物病原细菌也具有较好的抑制活性,其活性与硫酸链霉素相当。在活体生测中,铁屎米酮对苹果树腐烂病,苹果树炭疽病具有较好的防治效果,在浓度为1000mg/L时对苹果树炭疽病的治疗和保护作用均达到70%以上,对苹果树腐烂病的抑制活性达到80%以上。值得注意的是,在甲醇提取物浓度为2500mg/L时对苹果树腐烂病的保护作用达到88.73%,对其治疗效果达到95.67%。本文研究了苦木中生物碱的提取工艺,最终发现用甲醇含量为80%的甲醇水溶液,提取方式为回流提取的条件下苦木中的生物碱的提取最高,是一种较为经济高效的提取方法。本研究系统地评价了苦木甲醇提取物及五种生物碱的抑菌活性,并对其提取方法做了研究。本研究结果对苦木在农用杀菌剂领域的应用提供了理论基础。
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